血漿活性氧檢測(cè)試劑盒是一種利用新型熒光探針O12進(jìn)行血漿中活性氧檢測(cè)的試劑盒。本試劑盒中的O12 ROS探針為綠色熒光的活性氧探針，具有488/520nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)。O12 ROS探針在血漿中活性氧存在的條件下，被氧化生成綠色熒光物質(zhì)，綠色熒光強(qiáng)度與血漿內(nèi)活性氧水平成正比，檢測(cè)O12產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度就可以知道血漿內(nèi)活性氧

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產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 使用方便：可用熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)；

● 背景低，靈敏度高；

● 線(xiàn)性范圍寬，使用方便。。

檢測(cè)方法：

● 熒光分光光度計(jì) ● 熒光酶標(biāo)儀

樣本類(lèi)型：

● 新鮮血漿 ● 凍存血漿

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 熒光分光光度計(jì)或熒光酶標(biāo)儀，激發(fā)波長(zhǎng)488nm，發(fā)射波長(zhǎng)520±10nm，或者按照FITC熒光檢測(cè)條件檢測(cè)。 ● 離心機(jī) ● 移液器 ● PBS緩沖液或者HBSS ● 純水 ● 熒光專(zhuān)用黑色96孔板

使用注意事項(xiàng)：

● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

● O12染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)在室溫時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否則容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

● 使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)短離心使DMSO溶液集中于管底。

● 盡量縮短探針標(biāo)記后到測(cè)定所用的時(shí)間，以減少各種可能的誤差。

使用方法：

試劑準(zhǔn)備：

根據(jù)樣本數(shù)量，用純水將O12探針10倍稀釋。充分混勻，備用。

【注】：

● 不可以一次性將探針全部稀釋。

● 現(xiàn)配現(xiàn)用。

● 也可以不稀釋探針，直接在待檢測(cè)血漿樣品中加入1-2μL探針，但是需要用好的移液器和吸頭，注意操作過(guò)程，保證探針有效的加入了樣品中，并充分混勻。

● O12探針液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)在室溫時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

● 微量操作時(shí)，注意探針要有效加入血漿，避免沒(méi)有加入。

● 以下步驟使用的O12探針為此步驟稀釋過(guò)的探針。

樣本檢測(cè)：

1、在96孔板中加入100μL新鮮血漿樣本、10μL O12探針，用移液器吹打，使之充分混勻。

【注】：

● 注意選擇合適的96孔板，熒光檢測(cè)需要使用黑色板。

● 不同樣本的活性氧差異較大，需要根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整探針用量。一般加入10μL探針，染色終濃度按試劑盒中探針母液的100-1000倍稀釋?zhuān)?00倍稀釋適合大多數(shù)樣本。

● 如果熒光強(qiáng)度太強(qiáng)，超過(guò)了檢測(cè)儀器的量程，可以稀釋后再檢測(cè)。

● 以酶標(biāo)儀檢測(cè)為例。也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)，根據(jù)所使用儀器決定勻漿液體積和染色容器。

2、在37℃避光孵育15-30分鐘。

3、置于熒光光度計(jì)或酶標(biāo)儀中，后于激發(fā)波長(zhǎng)為488nm、發(fā)射波長(zhǎng)520nm檢測(cè)熒光強(qiáng)度。

【注】：

● 熒光強(qiáng)度強(qiáng)則活性氧含量高。

● 可以用實(shí)驗(yàn)中對(duì)照血漿樣本的熒光強(qiáng)度值為基準(zhǔn)，待測(cè)模型組血漿的熒光強(qiáng)度值占對(duì)照血漿的百分比來(lái)比較活性氧程度差異。

● 或使用熒光光度計(jì)等其它熒光檢測(cè)設(shè)備。

● 如果熒光強(qiáng)度太強(qiáng)，超過(guò)了儀器的檢測(cè)范圍，可以將孵育后的血漿稀釋后再檢測(cè)。

常見(jiàn)問(wèn)題分析：

● 活性氧結(jié)果如何分析？

ROS是多種物質(zhì)的統(tǒng)稱(chēng)，不像某一單一活性氧指標(biāo)，無(wú)法檢測(cè)其絕對(duì)的含量，只能通過(guò)設(shè)置參照樣本，以參照樣本的倍數(shù)來(lái)反映目標(biāo)樣本相對(duì)含量變化，這個(gè)“相對(duì)”是針對(duì)參照的。分析結(jié)果是定性的，也是沒(méi)有單位的，因?yàn)樗举|(zhì)上是一個(gè)比值（目標(biāo)/參照）。反映的是模型樣本通過(guò)具體的干預(yù)措施（如養(yǎng)分缺失、缺氧、藥物治療或遺傳基因操控等）如何影響其ROS的變化，測(cè)定其ROS是增加或者降低了。

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