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所在地：北京
型號：HR8193-50T
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更新時(shí)間：2023-05-31
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王欣(女士) （來電時(shí)請說是從給覽網(wǎng)看到我的)
● 離心機(jī)轉(zhuǎn)速有相對離心力（RCF，×g）和每分鐘轉(zhuǎn)速（RPM）兩種表示方式，有些離心機(jī)設(shè)置有RPM 和×g 顯示切換，但部分離心機(jī)沒有自動切換功能。需要用下面的公式進(jìn)行換算：
g=r×1.118×10-5×rpm2（r為有效離心半徑，即從離心機(jī)軸心到離心收集管底部中心位置的長度，單位為厘米) 例如: 轉(zhuǎn)速為3000rpm，有效離心半徑為10 cm，則相對離心力（RCF，×g）為=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
使用方法：
1、提取液制備：
每500μL冷的提取液A中加入10μL提取液B，混勻后置冰上備用。
【注】：
● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備提取液，提取液B不可以一次全部加入提取液A。
● 以下步驟使用到的提取液A為此步驟配制好的提取液A。
2、取培養(yǎng)好的微藻樣品，1000×g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。
3、用PBS洗滌微藻細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4、每300μL體積或300mg濕重微藻細(xì)胞沉淀物中加入500μL酵母提取液D，混勻后，在30℃條件下保溫15分鐘。
【注】：
● 微藻數(shù)量根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況調(diào)整，每次的提取液用量并不是一定的，請根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。
● 在處理有些微藻樣本時(shí)，在試劑D中加入終濃度0.2%的β-巰基乙醇有利于提高微藻細(xì)胞的得率。（選作，可不加）
5、在1000×g條件下離心5-10分鐘，移除上清，收集微藻沉淀。
6、用PBS洗滌微藻細(xì)胞沉淀一次，1000×g離心5分鐘，收集細(xì)胞，洗滌后盡可能吸干上清。
7、用提取液A重懸微藻細(xì)胞。每300μL細(xì)胞（沉淀體積）中加入1ml提取液A。
8、將微藻細(xì)胞懸液置振蕩器上37℃-55℃振蕩24-72小時(shí)。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。
● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，中間每隔幾小時(shí)用移液器吹打混勻即可。
● 根據(jù)下游細(xì)胞核的應(yīng)用選擇合適的溫度，最佳溫度為55℃，對細(xì)胞核各種蛋白活性要求較高的實(shí)驗(yàn)可以用較低溫度，使用37℃至室溫，適當(dāng)延長處理時(shí)間。
● 不同類型的微藻需要處理的時(shí)間差異較大。
● 部分細(xì)胞壁較厚的細(xì)胞類型可能需要處理更長時(shí)間?？梢匝娱L至72小時(shí)以上處理以提高細(xì)胞核得率。
9、離心力1000×g離心5分鐘，將上清移入另一離心管保存?zhèn)溆茫占?xì)胞沉淀。
10、用PBS洗滌微藻細(xì)胞沉淀一次，1000×g離心5分鐘，收集細(xì)胞，洗滌后盡可能吸干上清。
11、在微藻細(xì)胞沉淀中加入1ml試劑C重懸細(xì)胞，混勻。
12、將細(xì)胞懸液置振蕩器上振蕩20-30分鐘。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。
● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，室溫靜置，中間每隔幾分鐘用移液器輕輕吹打混勻即可。
13、離心力2000×g離心5分鐘，棄上清，收集沉淀。
14、用PBS洗滌沉淀1-2次。
15、沉淀即為微藻細(xì)胞核。將上述微藻細(xì)胞核沉淀用適當(dāng)緩沖液重懸后2-8℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。
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