產(chǎn)品名稱:人可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒

  英文名稱:Human(sICAM-1)ELISA Kit

  檢測方法雙抗夾心法/酶聯(lián)免疫方法

  規(guī)格96T/48T

  反應(yīng)時間3.5h

  反應(yīng)性Human

  樣本體積100μL

  檢測范圍：12.5 ng/mL–400 ng/mL。

  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

  重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10%，板間變異系數(shù)小于15%。

  有效期：6個月

  保存條件：2-8℃

  可檢測多種生物樣品，包括：血清、血漿、體液如尿液、細胞培養(yǎng)上清液和細胞/組織裂解液等。

  本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)的含量。

  【實驗原理】

  本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人sICAM-1抗體包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中的人sICAM-1會與包被抗體結(jié)合。依次加入生物素化的抗人sICAM-1抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素?？谷藄ICAM-1抗體與結(jié)合在包被抗體上的人sICAM-1結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值，sICAM-1濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣品中sICAM-1的濃度。

  試劑盒的組成

  96/48微孔板(1塊,已包被抗人可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒單抗)、樣品稀釋液(1瓶)、抗體工作液(1瓶)、酶標抗體工作液(1瓶)、底物稀釋液(1瓶)、終止液(1瓶)、洗滌液(20×,1瓶)、標準品(2000 pg/ml,2管,凍干粉)、OPD片(3片)、坐標紙(1張)。

  實驗準備工作

  1、試劑配制:洗滌液按1:20三蒸水稀釋;標準品在用前每管加入200?l蒸餾水溶解即可(具體見說明書);底物工作液應(yīng)在顯色前5-10 min將OPD片放入底物稀釋液中溶解,每片加5 ml液。

  2、標本收集:采集血清或體液盡早檢測,2~8℃保存一天需長時間須冷凍(-20℃)保存,避免反復(fù)凍融;組織(胎肝、胎腦等)實驗前一天組織勻漿,用90%體積RIPA裂解液(PH 8.0,50 mM Tris HCl、1%NP-40、,0.25%sodium deoxycholate、150 mM NaCl、1 mM EDTA)和10%體積的10 mM PMSF進行組織勻漿(10%),冰上裂解30 min,12000×20min后取上清,4℃待用。

  3、器材準備:酶標儀、37℃恒溫烤箱、濾紙、托盤、量筒、燒杯、各種規(guī)格的移液器、離心管、管架和廢液缸等。三蒸水自備。

  操作步驟

  1、設(shè)立標準孔8孔(根據(jù)樣品蛋白濃度可調(diào)整為6孔),每孔中先各加入樣品稀釋液100 ul,孔再加標準品100 ul,混勻后用移液器吸出100 ul,移至第二孔,如此反復(fù)作對倍稀釋至第7孔,后,從第7孔中吸出100 ul棄去,使之體積均為100 ul。第8孔為空白對照。

  2、加樣:待測樣品孔中每孔各加入待測樣品100ul。

  3、將反應(yīng)板置于37℃×120 min。

  4、洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上扣干。

  5、每孔中加入抗體工作液50ul。

  6、將反應(yīng)板充分混勻后置37℃×60 min。

  7、洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4~6次,向濾紙上扣干。

  8、每孔加酶標抗體工作液100ul。

  9、將反應(yīng)板置于37℃120 min。

  10、洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4~6次,向濾紙上扣干。

  11、每孔中加入底物工作液100ul,置于37℃暗處反應(yīng)5~10 min。

  12、每孔中加入50ul終止液混勻。

  13、用酶標儀在492 nm處測吸光值。

  人可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒計算結(jié)果與判斷

  1、以標準品1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、0 pg/ml之OD值在半對數(shù)紙上作圖,畫出標準曲線。

  2、所有OD值都應(yīng)減去空白管值后再計算。

  根據(jù)樣品OD值在該標準曲線圖上查出或根據(jù)標準曲線公式換算出相應(yīng)樣品中TNF-a含量。

  注意事項

  1、以上標準孔及待查樣品均建議做復(fù)孔,每次測定均要做標準孔。

  2、本試劑盒宜置-20℃冷藏保存。

  3、本人ELISA試劑盒取出的試劑在室溫(20~25℃)環(huán)境下使用,溶液應(yīng)輕輕搖勻后使用。

  4、本試劑盒含2M硫酸,不要將它與含疊氮化鈉的廢物混在一起。

  5、板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。

  6、避免交叉污染。如洗滌時向樣品待測蛋白含量可能高的一側(cè)傾倒。

  7、提前24 h打開烤箱預(yù)熱。

  8、底物工作液應(yīng)在顯色前5~10 min配制。若配制時間過長,會變質(zhì)。

  9、甩盡孔內(nèi)液體,每孔加350 ul左右洗滌液,靜止30 s后甩盡。尤其加抗體工作液或底物時盡量弄干孔內(nèi)液體。且孵育過程中要蓋住各反應(yīng)孔,防止液體恢復(fù)。

  10、盡量防止樣品待測蛋白濃度過高而出現(xiàn)酶標儀顯示out。當酶標儀測定值出現(xiàn)許多out時,可通過稀釋一定倍數(shù)后用可見光分光計測定,所有孔均同時測定.