英文名稱:TGFβ1 ELISA Kit
檢測原理：
ELISA試劑盒采用抗體夾心法:將抗某蛋白抗體包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的某蛋白與抗體結(jié)合，加入生物素化的抗某蛋白抗體，再加入SABC復(fù)合物與生物素抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，然后加入TMB顯色底物，顯色劑顯藍(lán)色，后加終止液變黃色，游離的成分被洗去。在450 nm處測OD值，某蛋白濃度與OD值之間呈正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出標(biāo)本中某蛋白的濃度。
試劑盒組分: （保存溫度4℃）
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名 稱 |
規(guī)格（48 T） |
規(guī)格（96 T） |
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預(yù)包被酶標(biāo)板 |
8×6條 |
8×12條 |
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標(biāo)準(zhǔn)品 |
1支 |
1支 |
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標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液 |
10ml |
15ml |
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生物素化檢測抗體（100×） |
60ul |
120ul |
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生物素化檢測抗體稀釋液 |
6ml |
12ml |
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SABC復(fù)合物 |
6ml |
12ml |
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TMB顯色液（A/B） |
各3ml |
各6ml |
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終止液 |
6ml |
12ml |
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20×濃縮洗滌液 |
30ml |
60ml |
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封板膠紙 |
2張 |
4張 |
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產(chǎn)品說明書 |
1份 |
1份 |
本試劑盒用于血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液及其它生物體液。
標(biāo)本收集與試劑準(zhǔn)備:
1. 血清、血漿樣本收集應(yīng)使用一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝均可），血清、血漿避免使用溶血，高血脂標(biāo)本，標(biāo)本懸浮物應(yīng)離心去除，使標(biāo)本清澈透明。待測樣本應(yīng)盡早檢測，2-8℃保存48小時；長時間須冷凍（-20℃或-80℃）保存，避免反復(fù)凍融。
2. 洗滌液配置：用蒸餾水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的蒸餾水）
3. 標(biāo)準(zhǔn)品配制：取7個1.5ml離心管，分別標(biāo)注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。從至七管中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液200ul。在管中加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液200ul，置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出200ul，移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第六管中吸出200ul棄去，第七管為空白對照。
4. 生物素化抗體工作液配置:使用前20分鐘，用生物素化抗體稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×工作液，根據(jù)所需用量配置，當(dāng)日使用，剩余棄之。
5. TMB顯色液的配置：使用前10分鐘，將TMB顯色液A液和B液1：1混合，避光放置備用。
6. 如果您檢測的樣本中靶蛋白濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品高值，建議重新檢測，請根據(jù)實際情況，適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實驗，以確定稀釋倍數(shù))。
檢測程序:
1. 加樣：空白孔加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液，其余孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品50ul，將反應(yīng)板混勻后置37℃，40分鐘。
2. 洗板：用1×洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，每孔加入1×洗液350μl，每次震蕩/浸泡1-2分鐘，向濾紙上印干。
3. 空白孔加入100ul生物素化抗體稀釋液，其余孔各加入1×的生物素化抗體工作液100ul，混勻后置37℃，30分鐘。
4. 洗板：同上。
5. 每孔加入SABC復(fù)合物工作液100ul，混勻后置37℃，20分鐘。
6. 洗板：同上。
7. 每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul，混勻后置37 ℃暗處反應(yīng)10-20分鐘（具體顯色時間根據(jù)顯色結(jié)果而定）。
8. 每孔加入100ul終止液，混勻，30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。
結(jié)果判斷與計算：
1. 所有OD值建議減除空白值后再行計算，如空白OD低于0.1，也可以直接計算。
2. 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，手工繪制或用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品OD值計算出相應(yīng)含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可。
試劑盒性能:
1、 檢測范圍:31.2-2000pg/mL
2、 特異性:同時可檢測重組或天然的某種蛋白或抗體，不與其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。
3、 重復(fù)性:板內(nèi)，板間變異系數(shù)均小于10%。
注意事項
1. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測時建議作雙孔檢測，每次檢測都應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2. 洗滌過程很關(guān)鍵，洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及OD值錯誤地升高，從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能 有結(jié)晶,屬于正常現(xiàn)象，37℃水浴使結(jié)晶完全溶解后再配制洗滌液。
3. 檢測時所有試劑都要恢復(fù)到室溫，板條開封后剩余板條需封好，放回袋中2 個月內(nèi)用完。
4. 試劑盒使用超敏TMB溶液，若顯色過深會出現(xiàn)絮狀物，屬正?，F(xiàn)象，不影響結(jié)果判讀。
5. 僅用于科研，不能用于臨床診斷！
