英文名稱:LDH Cytotoxicity Assay Kit
產(chǎn)品規(guī)格：100t/500t
用途：又稱乳酸脫氫酶漏出率檢測試劑盒或乳酸脫氫酶釋放檢測試劑盒，通過檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH活性或漏出率可反應(yīng)藥物的細(xì)胞毒性
儲(chǔ)存條件：-20℃，避光，12個(gè)月
乳酸脫氫酶細(xì)胞毒性檢測試劑盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也稱乳酸脫氫酶檢測試劑盒(LDH Assay Kit)或乳酸脫氫酶釋放檢測試劑盒(LDH Release Assay Kit)，是一種基于diaphorase催化的INT顯色反應(yīng)，通過比色法檢測細(xì)胞毒性時(shí)釋放的乳酸脫氫酶活性或檢測其它樣品中的乳酸脫氫酶活性的試劑盒。
本試劑盒可以用于常規(guī)的乳酸脫氫酶活性的檢測，geng常用于以LDH釋放為指標(biāo)的細(xì)胞毒性檢測。同時(shí)，基于細(xì)胞總?cè)樗崦摎涿富钚缘臋z測，本試劑盒也可以用于檢測細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測。
細(xì)胞凋亡或壞死而造成的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的破壞會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞漿內(nèi)的酶釋放到培養(yǎng)液里，其中包括酶活性較為穩(wěn)定的乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)。通過檢測從質(zhì)膜破裂的細(xì)胞中釋放到培養(yǎng)液中的LDH的活性，就可以實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞毒性的定量分析。LDH釋放被看做細(xì)胞膜完整性的重要指標(biāo)，并被廣泛用于細(xì)胞毒性檢測。LDH釋放被認(rèn)為是以前使用放射性的51Cr標(biāo)記細(xì)胞，隨后通過51Cr釋放進(jìn)行細(xì)胞膜完整性檢測的安全有效的替代方法。
本試劑盒的基本原理是，在乳酸脫氫酶的作用下，NAD+被還原生成NADH，NADH和INT(2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脫氫酶(diaphorase)催化反應(yīng)生成NAD+和強(qiáng)生色物甲臜(formazan)，在490nm波長下產(chǎn)生吸收峰，從而可以通過比色來定量乳酸脫氫酶的活性。吸光度與乳酸脫氫酶活性成線性正相關(guān)。該酶聯(lián)反應(yīng)原理的示意圖如下：
可檢測細(xì)胞培養(yǎng)液、細(xì)胞裂解液等樣品中乳酸脫氫酶的活性。一個(gè)試劑盒可進(jìn)行500次檢測。
保存條件：-20℃保存，一年有效。需注意避免反復(fù)凍融。需避光保存。試劑盒解凍后可以短期4℃存放，2-3天內(nèi)有效。
注意事項(xiàng)：
冷凍會(huì)使樣品中部分乳酸脫氫酶失活，4℃可放置2-3天。建議樣品準(zhǔn)備好后盡量當(dāng)天完成測定。
如果檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中的乳酸脫氫酶，由于血清含有乳酸脫氫酶，建議血清的使用濃度不要超過1%，并蕞好使用熱滅活血清。如果一定需要使用10%血清，在檢測時(shí)一定要設(shè)置沒有細(xì)胞，但加入了相同體積培養(yǎng)液的對(duì)照孔，以用于消除背景。
細(xì)胞過度生長、密度過高、離心速度過大、培養(yǎng)箱內(nèi)外溫差過大，都會(huì)造成細(xì)胞釋放乳酸脫氫酶增加。
如果希望進(jìn)行乳酸脫氫酶活性的絕-對(duì)定量，用戶需自備乳酸脫氫酶標(biāo)準(zhǔn)品。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
