產(chǎn)品：堿性磷酸酶染色液(改良Gomori鈣鈷法)
產(chǎn)品分類：酶類染色
儲存條件：4℃,避光,3個月
規(guī)格：3×50ml
產(chǎn)品信息：堿性磷酸酶染色
注意事項：屬于金屬沉淀法,堿性磷酸酶活性出呈棕黑色,可能出現(xiàn)假陽性,采用陰性對照。二甲苯應(yīng)采用AR以上級別。

簡介：
堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶，廣泛分布于哺乳動物組織內(nèi)，其活性所需zui適pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處（細(xì)胞膜），如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細(xì)膽管膜以及微動脈和毛細(xì)血管動脈部之內(nèi)皮。此酶還見于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細(xì)胞之中性顆粒以及平滑肌之細(xì)胞膜及吞飲小泡。

現(xiàn)用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性。此法以天然存在的β-甘油磷酸鈉為底物，經(jīng)酶水解釋放出磷酸，立即被鈣離子沉淀為磷酸鈣，再依次被置換為磷酸鈷和硫化鈷,zui終產(chǎn)物為黑色硫化鈷沉淀。

自備材料：
1、 蒸餾水
2、溫箱或水浴鍋

操作步驟（僅供參考）：
(一)石蠟切片染色
1、石蠟切片脫蠟至蒸餾水。
2、切片入 ALP 孵育液中，37°孵育2~12h。
3、流水洗 2min， 入蒸餾水。
4、入硝酸鈷溶液中，37°孵育5min。
5、流水洗 5min， 入蒸餾水。
6、在上述過程中配制ALP硫化工作液，即取試劑（C）用蒸餾水稀釋50倍，即為ALP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育2min。
7、流水洗 10min， 入蒸餾水。
8、（可選）核固紅復(fù)染細(xì)胞核，蒸餾水洗。
9、石蠟切片常規(guī)脫水、透明，樹膠封片。
（二）冰凍切片染色
1、冰凍切片在丙酮氯-仿等量混合液內(nèi)，4℃固定2-5min。
2、切片入ACP孵育液，置于37℃孵育5-15min。
3、流水洗 2min， 入蒸餾水。
4、入硝酸鈷溶液中，37°孵育5min。
5、流水沖洗5min， 入蒸餾水。
6、在上述過程中配制ALP硫化工作液，即取試劑（C）用蒸餾水或者去離子水稀釋50倍，即為ALP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育1-2min。
7、流水洗 10min， 入蒸餾水。
8、（可選）核固紅復(fù)染細(xì)胞核，蒸餾水洗。甘油明膠封片。

染色結(jié)果：
酶活性補(bǔ)位：黑素硫化鉛沉淀
細(xì)胞核：根據(jù)復(fù)染液不同而不同

陰性對照：（可選）
1、ALP對照液為不含底物的孵育液。取相同的切片入ALP對照液，其余同上。結(jié)果為陰性。
2、（備選方案）切片進(jìn)入ALP孵育液之前，可先經(jīng)碘液和5%硫代硫酸鈉溶液各3min，充分水洗后再進(jìn)行孵育等步驟，可用此法做陰性對照。

注意事項：
1、ALP孵育液、ALP硫化液易失效，zui好分成小分儲存。一經(jīng)開啟立即使用。
2、ALP硫化液具有腐蝕性和刺激性氣味，應(yīng)小心操作。
3、對冰凍切片染色時,應(yīng)減少切片在室溫暴露的時間。
4、樣本需新鮮，取材后應(yīng)立即處理，否則會影響酶的活性。
5、組織固定需在4°冰箱進(jìn)行，時間不宜超過24h，否則酶活性會減弱或消失。