Catalogue No.: C712

Product Format: a T25 flask

Culture Properties：貼壁

Complete Growth Medium: 89%1640+10%FBS+1%雙抗

Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

Application: Cells and cancer research

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

Components

Item Specifications

a T25 flask 2X106

Manual 1 copy

Operation steps for cell culture

1. 吸走用于培養(yǎng)基，加入 3-5mL PBS 后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞；

2. 吸干凈 PBS 后加入 1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細胞表

面，培養(yǎng)瓶放 37 度培養(yǎng)箱消化；

（細胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴重影響細胞狀態(tài)，導致細胞傳代死亡漂浮或

者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止

消化到細胞完全漂浮?；靹蚣毎麜r盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）

3. 加入 6-8ml 完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細胞混勻；

4. 將混勻的細胞 1000rpm（約 150g）離心 3min，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸 37 度培

養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；

傳代比例: 不同細胞生長速度不一，具體傳代比例視細胞生長速度而定，大部分細胞適用

1:3-1:4 傳代，生長較慢的細胞可以 1:2 傳代。

Cell cryopreservation

1.凍存液：92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實驗室條件自行選擇）

2.降溫步驟：4 度 10min，-20 度 2h，-80 過夜后液氮保存。Tips：

1. 細胞經(jīng)過運輸后，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。貼壁細胞

可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900-1000rpm(約 150g)離心 3min，棄上清。加 5ml

PBS 重懸細胞，再 900-1000rpm(約 150g)離心 3min，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸接種到新的培

養(yǎng)瓶。第二次 PBS 重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略 PBS 重懸的步

驟；如果碎片很多，建議 PBS 多洗幾次。

2. 細胞生長不均時，可以將細胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。

3. 細胞生長緩慢時，可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)（zui高不超過 20%），也可以根據(jù)細胞生長狀態(tài)，

選擇傳代細胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

4. 不同細胞貼壁性差異比較大，所以消化時間差別較大，20s-10min 均有可能，具體以細胞消化到

相互分離但未脫落，并可以輕輕吹下為準，嚴禁消化到細胞完全漂浮。客戶消化過度導致細胞死

亡、漂浮、生長緩慢，不提供售后服務。

5. 干冰發(fā)貨均為兩支，客戶先復蘇一支，若復蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導下復蘇第二支。若

客戶同時復蘇兩支均狀態(tài)不佳，我方不提供售后服務。

6. 細胞狀態(tài)正常時，應盡快凍存細胞保種，凍存后應隨機抽取一支檢測凍存效果。我方不對客戶凍

存細胞導致死亡負責，客戶凍存細胞死亡不提供售后服務。

Notice：

客戶收到細胞有任何疑問請及時致電我們，細胞收到后 1 周內(nèi)沒有任何電話，或其他形式回訪，

默認為細胞質(zhì)量沒問題，之后出了任何問題不給予售后。細胞售后只提供一次，若重發(fā)后再

次培養(yǎng)死亡不再補發(fā)，細胞收貨時已經(jīng)死亡或密度不足的除外。