Cat number：KFS030
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For Research Use Only
一、 試劑盒說明
適用于免疫組化方法的石蠟包埋、冰凍切片、培養(yǎng)細(xì)胞涂片及血液標(biāo)本。
二、試劑盒組份
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組份 |
KFS030(60 片) |
KFS030(300 片) |
儲(chǔ)存條件 |
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試劑 A: 10％山羊血清封閉液 |
3mL |
15mL |
2-8℃ |
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試劑 B: 抗小鼠生物素化二抗 |
3mL |
15mL |
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試劑 C: 鏈親和素標(biāo)記 HRP |
3mL |
15mL |
-20℃，避光 |
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試劑 D: 20 倍濃縮 DAB 底物緩沖液 |
160μL |
800μL |
2-8℃，避光 |
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試劑 E: 20 倍濃縮 DAB 顯色液 |
160μL |
800μL |
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試劑 F: 20 倍濃縮底物溶液 |
160μL |
800μL |
三、試劑盒以外自備儀器和試劑
1、二甲苯、乙醇、無水甲醇
2、蒸餾水或去離子水
3、30％ H2O2
4、10 mM PBS, pH 7.4 或 50mM TBS, pH 7.8
5、一抗（小鼠抗體）
6、蘇木精染液
7、封片膠
8、顯微鏡
四、使用注意事項(xiàng)
1、檢測標(biāo)本時(shí)需同時(shí)做陰性對照和陽性對照。
2、DAB 是一潛在致癌物，使用時(shí)請注意自我防護(hù)。
3、DAB 顯色液需現(xiàn)用現(xiàn)配，避光放置，且在 30 分鐘內(nèi)染色。
4、用滴瓶加液時(shí)，每一滴的體積為 50μL。
五、推薦染色步驟：（以石蠟切片為例）
1、標(biāo)本制備
石蠟切片用二甲苯常規(guī)脫蠟、入水、抗原修復(fù)（可根據(jù)一抗說明書推薦方法進(jìn)行操作）。染色前用 PBS 浸泡組織或細(xì)胞涂片 10 分鐘。（注意：此次步驟起，嚴(yán)禁標(biāo)本或組織切片干燥）
2、染色
1) 石蠟切片放入 3％H2O2-甲醇液中浸泡 10 分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化氫酶的作用。
2) 2）用 PBS 洗 2 分鐘/次×3 次。
3) 加一滴試劑 A 于組織切片上（需完全覆蓋待檢組織）孵育 10 分鐘。
4) 倒掉或吸干液體（不要沖洗）。
5) 每張切片加二滴(100μL)或適量一抗(需完全覆蓋待檢組織)，濕盒內(nèi)孵育30～60分鐘。
6) 用 PBS 洗 2 分鐘/次×3 次。
7) 每張切片加一滴試劑 B（需完全覆蓋待檢組織），孵育 10 分鐘。
8) 用 PBS 洗 2 分鐘次×3 次。
9) 每張切片加一滴試劑 C（需完全覆蓋待檢組織），孵育 10 分鐘。
10) 用 PBS 洗 2 分鐘/次×3 次。
11) 制備 DAB 顯色液（需現(xiàn)用現(xiàn)配；以染一張切片為例；可根據(jù)需要一次染多張切片，具體
量見下表）
① 取 2.5μL 試劑 D 加入到 50μL 蒸餾水中，混勻。
② 取 2.5μL 試劑 E、2.5μL 試劑 F 加入①中，混勻。
配制 DAB 顯色液所需試劑 D、E、F 用量表
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切片數(shù)（張） |
試劑 D |
試劑 E |
試劑 F |
蒸餾水 |
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1 |
2.5μL |
2.5μL |
2.5μL |
50μL |
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2 |
5μL |
5μL |
5μL |
100μL |
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3 |
7.5μL |
7.5μL |
7.5μL |
150μL |
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4 |
10μL |
10μL |
10μL |
200μL |
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5 |
12.5μL |
12.5μL |
12.5μL |
250μL |
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6 |
15μL |
15μL |
15μL |
300μL |
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7 |
17.5μL |
17.5μL |
17.5μL |
350μL |
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8 |
20μL |
20μL |
20μL |
400μL |
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9 |
22.5μL |
22.5μL |
22.5μL |
450μL |
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10 |
25μL |
25μL |
25μL |
500μL |
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20 |
50μL |
50μL |
50μL |
1mL |
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30 |
75μL |
75μL |
75μL |
1.5mL |
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40 |
100μL |
100μL |
100μL |
2mL |
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50 |
125μL |
125μL |
125μL |
2.5mL |
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60 |
150μL |
150μL |
150μL |
3mL |
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100 |
250μL |
250μL |
250μL |
5mL |
12) 每張切片加一滴上述 DAB 顯色液，室溫顯色 2～5 分鐘（可在鏡下掌握顯色程度）。
13) 自來水充分沖洗。
14) 復(fù)染，鹽酸酒精分化。
15) 脫水、透明、封片、鏡檢。
3、結(jié)果陽性結(jié)果為在抗原定位處染棕黃或棕褐色。
