產(chǎn)品編號(hào)：KFS025

儲(chǔ)存條件：2-8℃，避光，有效期 6 個(gè)月

For Research Use Only

一、試劑盒說(shuō)明

本試劑盒可用于免疫熒光方法以顯示人、大、小鼠來(lái)源的組織樣本cTnI抗原分布。本試劑盒適用于常規(guī)福爾馬林固定石蠟包埋切片、冰凍切片、培養(yǎng)固定的細(xì)胞爬片等。

二、試劑盒組份

備注：抗體在 2-8℃可以保存 6 個(gè)月，長(zhǎng)期保存可以分裝保存于-20℃。

三、試劑盒以外自備試劑和儀器

二甲苯、乙醇、蒸餾水或去離子水、甲醇、10%山羊血清封閉液、10 mM PBS（pH 7.4）、免疫組化筆、熒光防淬滅封片膠、顯微鏡。

四、使用注意事項(xiàng)

1. 檢測(cè)標(biāo)本時(shí)需同時(shí)做陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。

2. 在超過(guò)有效期的試劑盒中一種或多種試劑的活性可能降低，因此不得使用過(guò)期的試劑盒，不同批號(hào)間試劑盒也不能交叉混用。

五、推薦操作方法（以石蠟切片為例）

1. 石蠟切片二甲苯脫蠟、梯度酒精水化，用PBS(pH7.4)沖洗三次，每次3分鐘（3×3min）。

（注意：從此步驟起，嚴(yán)禁標(biāo)本或組織切片干燥）。

2. 抗原修復(fù)（選做步驟：石蠟組織切片建議進(jìn)行蛋白酶K修復(fù)20ug/ml，37℃，30min）。

3. 除去PBS液，每片加50~100μl的10%山羊血清封閉液（自備），濕盒內(nèi)室溫或37度孵育

30分鐘。PBS洗滌3× 2min。

4. 除去PBS液，每張切片加50~100μl的cTnI兔多抗(用戶(hù)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行自選，用量體積按完全覆蓋組織為準(zhǔn)，建議抗體稀釋比例為：固定細(xì)胞1:100-500；冰凍切片1:100-500；石蠟切片1:50-200)，濕盒內(nèi)室溫（或37度）孵育60分鐘或4℃過(guò)夜。PBS洗滌3×2min。

5. 除去PBS液，每張切片加50~100μl熒光標(biāo)記二抗工作液（體積用量按完全覆蓋組織為準(zhǔn)，

FITC標(biāo)記羊抗兔IgG，PBS稀釋抗體1:50~1:200）。PBS洗滌3×2min。

6. 除去PBS液，以甲醇稀釋20×DAPI溶液至1×，每片加50~100μl避光染色10~15min。

7. PBS洗滌2次，以甘油明膠（60%甘油-PBS）或者防淬滅封片膠封片，在熒光顯微鏡下觀察拍照。

六、可能出現(xiàn)的問(wèn)題及解決辦法

1. 脫蠟不徹底，容易出現(xiàn)非特異性背景染色，建議免疫組化切片脫蠟與常規(guī)HE脫蠟分開(kāi)。

2. 操作過(guò)程中沖洗不充分，容易出現(xiàn)非特異性背景染色，需嚴(yán)格控制沖洗時(shí)間與次數(shù)。

3. 為防止可能出現(xiàn)的假陽(yáng)性、假陰性結(jié)果，建議在實(shí)驗(yàn)過(guò)程設(shè)置陽(yáng)性與陰性對(duì)照。

4. 操作中滴加試劑時(shí)緩沖液PBS未瀝干致使試劑稀釋?zhuān)瑢⒁鹑旧珡?qiáng)度變?nèi)趸蚣訇幮园l(fā)生。因此，每步滴加試劑前應(yīng)將組織片上的PBS液除干，但又必須預(yù)防干片。