(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。?。?)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入pbs 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl?!?/div>
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min?!?/div>
(6)洗板,同(4)?!?/div>
(7)每孔加1:5000稀釋的hrp-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl?!?/div>
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min?!?/div>
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(9)洗板,同(4)?!?/div>
(10)每孔加tmb顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min?!?/div>
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(11)每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應(yīng)?!?/div>
(12)分別測(cè)450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2,終測(cè)得的od值為兩者之差(w1-w2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(s)和陰性對(duì)照(n)的 od值后,計(jì)算s/n值。s/n≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
注:所用溶液配方
(1) pbs:稱取0.2g kh2p04, 2.9g na2hp04?12h20、8.0g nacl, 0.2g kcl,加雙蒸水至1000ml。
(2)包被緩沖液:稱取1.59g na2co3, 2.938 nahco3,加雙蒸水至 1000m1。
(3)洗滌液(pbst):含0.05% tween-20的pbs。
(4)稀釋液:含0.1%牛血清白蛋白(bsa)的pbs,主要用以稀釋抗體、標(biāo)準(zhǔn)品、樣品。
(5)tmb顯色液:稱取1.84g na2hp04.12h20, 0.51 g檸檬酸,加雙蒸水至1o0ml,配成檸檬酸-磷酸緩沖溶液。用10.5 ml 檸檬酸-磷酸緩沖溶液溶解1錠tmb,再加入35μl 3% h2o2
(6)細(xì)胞裂解液:1% tritonx-100,137mmol/l nacl,20mmol/l tris-hcl,2mmol/l edta,1mmol/l pmsf,ph 7.4。(其中pmsf溶于異丙醇中,配成1o mmo/l,-20℃ 貯存?zhèn)溆谩?br />
小鼠鈣結(jié)合蛋白(CR)檢測(cè)試劑盒廠家 其他產(chǎn)品:
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Aurora A+B+C 有絲分裂激酶A/B/C抗體
ATK 蛋白酪氨酸激酶ATK抗體
ACSL1 長(zhǎng)鏈脂肪酸輔酶A連接酶1/2抗體
ACOX2 過氧化物酶酰基輔酶A氧化酶2抗體
ACAT1 膽固醇?;D(zhuǎn)移酶1抗體
phospho-ALK (Tyr1278 + Tyr1282 + Tyr1283) 磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體
phospho-arfaptin 2 (Ser260) 磷酸化ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白2抗體
Phospho-Aurora B (Thr232) + Aurora C (Thr198) 磷酸化有絲分裂激酶B/C抗體
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phospho-ADRB2 (Ser346) 磷酸化腎上腺素能受體β2抗體
APS APS抗體
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