探討蔓荊子黃素對(duì)單核巨噬細(xì)胞的影響
發(fā)布時(shí)間：2018-09-11瀏覽次數(shù)：1867返回列表
摘要 ：目的：通過蔓荊子黃素對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性及 RAW264.7 細(xì)胞增殖和凋亡作用的研究，探討蔓荊子黃素對(duì)單核巨噬細(xì)胞的影響。
方法：分別用含有不同濃度蔓荊子黃素作用于小鼠腹腔巨噬細(xì)胞與小鼠單核巨噬細(xì)胞 RAW264.7，于 24、48 及 72h 后采用 CCK-8 檢測(cè)細(xì)胞活性。
使用：AO/EB 染色觀察 RAW264.7 細(xì)胞凋亡變化 ；應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè) RAW264.7 細(xì)胞凋亡率。通過熒光探針 DCFH-DA 檢測(cè) RAW264.7 細(xì)胞活性氧水平，使用 JC-1 染色標(biāo)記線粒體膜電位的變化。
結(jié)果：CCK-8 法檢測(cè)結(jié)果顯示，蔓荊子黃素對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的細(xì)胞活性及 RAW264.7 細(xì)胞的增殖都有抑制作用，呈劑量與時(shí)間依賴關(guān)系，尤其對(duì)具有增殖能力的 RAW264.7細(xì)胞活性抑制作用更強(qiáng)。AO/EB 染色結(jié)果顯示，RAW264.7 細(xì)胞經(jīng)濃度為 5 及 10μmol/L 的蔓荊子黃素處理后，細(xì)胞表現(xiàn)為凋亡形態(tài) ；流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，蔓荊子黃素誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞 Sub-G 1 期代表凋亡細(xì)胞的百分比增加（ P <0.05）。蔓荊子黃素作用于 RAW264.7 細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)活性氧水平提高；JC-1 染色結(jié)果顯示，蔓荊子黃素能使 RAW264.7 細(xì)胞的線粒體膜電位下降。
結(jié)論：蔓荊子黃素能夠抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞與小鼠單核巨噬細(xì)胞 RAW264.7 活性，尤其對(duì)具有增殖能力的 RAW264.7 細(xì)胞活性抑制作用更強(qiáng)，可以促進(jìn)其凋亡，其作用機(jī)制與增加細(xì)胞內(nèi)活性氧水平和降低線粒體膜電位有關(guān)。蔓荊子為馬鞭草科植物單葉蔓荊或蔓荊的干燥成熟果實(shí)，在我國(guó)zui早的藥學(xué)專著《神農(nóng)本草經(jīng)》列為上品，記載有“主筋骨間寒熱，濕痹拘攣，明目，堅(jiān)齒，利九竅，去白蟲”。蔓荊子為臨床常用中藥，其性寒、味辛苦，入肝、胃、膀胱經(jīng)，具有疏散風(fēng)熱、清利頭目的功效，用于治療風(fēng)熱感冒頭痛、齒齦腫痛、目赤多淚、目暗不明及頭暈?zāi)垦５劝Y。
有研究表明，蔓荊子具有鎮(zhèn)痛、抗炎、降壓、抗菌、祛痰和抗腫瘤等作用。主要成分含揮發(fā)油、微量生物堿、維生素 A、蔓荊子黃素、蔓荊子堿及 γ- 氨基丁酸等。其中，蔓荊子黃素被認(rèn)為是主要有效成分之一，藥典規(guī)定不得低于0.030% 要求，一般含有量在 0.027% ～ 0.139%之間。
蔓荊子黃素（Vitexicarpin），又稱為紫花牡荊素（Casticin），屬于多甲氧基黃酮類化合物，具有抗腫瘤、抗氧化、抑制炎癥反應(yīng)和免疫抑制等多方面的藥理作用。近年來在抗腫瘤作用方面，有研究顯示蔓荊子黃素對(duì)乳腺癌、肺癌、宮頸癌、肝癌及胃癌等多種腫瘤細(xì)胞有較強(qiáng)的增殖抑制活性，有可能作為植物來源的抗腫瘤候選藥物。
另外，其免疫調(diào)節(jié)作用也較早受到關(guān)注。YOU 等zui早報(bào)道，蔓荊子黃素能夠有效抑制小鼠 T 淋巴細(xì)胞和 B 淋巴細(xì)胞的增殖。MESAIK 等研究發(fā)現(xiàn)，蔓荊子黃素能夠?qū)魏思?xì)胞的氧化裂解產(chǎn)生顯著的抑制作用，對(duì)嗜中性粒細(xì)胞的趨化性和植物凝血素刺激的 T 淋巴細(xì)胞也顯示抑制作用。林珊等采用乙酸誘導(dǎo)的小鼠腹膜毛細(xì)血管通透性增加的模型，發(fā)現(xiàn)蔓荊子黃素具有明顯的體內(nèi)抗炎作用。
王紅英等研究發(fā)現(xiàn)，紫花牡荊素可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子改善佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠足跖腫脹度。上述研究顯示，蔓荊子黃素治療炎癥或免疫調(diào)節(jié)性疾病可能有良好應(yīng)用前景，然而目前為止，對(duì)屬于免疫細(xì)胞的單核 / 巨噬細(xì)胞作用的研究未見任何報(bào)道。本研究通過對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的細(xì)胞活性以及對(duì)單核巨噬細(xì)胞 RAW264.7 的細(xì)胞增殖、凋亡的研究，來揭示蔓荊子黃素對(duì)免疫的調(diào)節(jié)作用。
方法：分別用含有不同濃度蔓荊子黃素作用于小鼠腹腔巨噬細(xì)胞與小鼠單核巨噬細(xì)胞 RAW264.7，于 24、48 及 72h 后采用 CCK-8 檢測(cè)細(xì)胞活性。
使用：AO/EB 染色觀察 RAW264.7 細(xì)胞凋亡變化 ；應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè) RAW264.7 細(xì)胞凋亡率。通過熒光探針 DCFH-DA 檢測(cè) RAW264.7 細(xì)胞活性氧水平，使用 JC-1 染色標(biāo)記線粒體膜電位的變化。
結(jié)果：CCK-8 法檢測(cè)結(jié)果顯示，蔓荊子黃素對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的細(xì)胞活性及 RAW264.7 細(xì)胞的增殖都有抑制作用，呈劑量與時(shí)間依賴關(guān)系，尤其對(duì)具有增殖能力的 RAW264.7細(xì)胞活性抑制作用更強(qiáng)。AO/EB 染色結(jié)果顯示，RAW264.7 細(xì)胞經(jīng)濃度為 5 及 10μmol/L 的蔓荊子黃素處理后，細(xì)胞表現(xiàn)為凋亡形態(tài) ；流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，蔓荊子黃素誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞 Sub-G 1 期代表凋亡細(xì)胞的百分比增加（ P <0.05）。蔓荊子黃素作用于 RAW264.7 細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)活性氧水平提高；JC-1 染色結(jié)果顯示，蔓荊子黃素能使 RAW264.7 細(xì)胞的線粒體膜電位下降。
結(jié)論：蔓荊子黃素能夠抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞與小鼠單核巨噬細(xì)胞 RAW264.7 活性，尤其對(duì)具有增殖能力的 RAW264.7 細(xì)胞活性抑制作用更強(qiáng)，可以促進(jìn)其凋亡，其作用機(jī)制與增加細(xì)胞內(nèi)活性氧水平和降低線粒體膜電位有關(guān)。蔓荊子為馬鞭草科植物單葉蔓荊或蔓荊的干燥成熟果實(shí)，在我國(guó)zui早的藥學(xué)專著《神農(nóng)本草經(jīng)》列為上品，記載有“主筋骨間寒熱，濕痹拘攣，明目，堅(jiān)齒，利九竅，去白蟲”。蔓荊子為臨床常用中藥，其性寒、味辛苦，入肝、胃、膀胱經(jīng)，具有疏散風(fēng)熱、清利頭目的功效，用于治療風(fēng)熱感冒頭痛、齒齦腫痛、目赤多淚、目暗不明及頭暈?zāi)垦５劝Y。
有研究表明，蔓荊子具有鎮(zhèn)痛、抗炎、降壓、抗菌、祛痰和抗腫瘤等作用。主要成分含揮發(fā)油、微量生物堿、維生素 A、蔓荊子黃素、蔓荊子堿及 γ- 氨基丁酸等。其中，蔓荊子黃素被認(rèn)為是主要有效成分之一，藥典規(guī)定不得低于0.030% 要求，一般含有量在 0.027% ～ 0.139%之間。
蔓荊子黃素（Vitexicarpin），又稱為紫花牡荊素（Casticin），屬于多甲氧基黃酮類化合物，具有抗腫瘤、抗氧化、抑制炎癥反應(yīng)和免疫抑制等多方面的藥理作用。近年來在抗腫瘤作用方面，有研究顯示蔓荊子黃素對(duì)乳腺癌、肺癌、宮頸癌、肝癌及胃癌等多種腫瘤細(xì)胞有較強(qiáng)的增殖抑制活性，有可能作為植物來源的抗腫瘤候選藥物。
另外，其免疫調(diào)節(jié)作用也較早受到關(guān)注。YOU 等zui早報(bào)道，蔓荊子黃素能夠有效抑制小鼠 T 淋巴細(xì)胞和 B 淋巴細(xì)胞的增殖。MESAIK 等研究發(fā)現(xiàn)，蔓荊子黃素能夠?qū)魏思?xì)胞的氧化裂解產(chǎn)生顯著的抑制作用，對(duì)嗜中性粒細(xì)胞的趨化性和植物凝血素刺激的 T 淋巴細(xì)胞也顯示抑制作用。林珊等采用乙酸誘導(dǎo)的小鼠腹膜毛細(xì)血管通透性增加的模型，發(fā)現(xiàn)蔓荊子黃素具有明顯的體內(nèi)抗炎作用。
王紅英等研究發(fā)現(xiàn)，紫花牡荊素可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子改善佐劑性關(guān)節(jié)炎小鼠足跖腫脹度。上述研究顯示，蔓荊子黃素治療炎癥或免疫調(diào)節(jié)性疾病可能有良好應(yīng)用前景，然而目前為止，對(duì)屬于免疫細(xì)胞的單核 / 巨噬細(xì)胞作用的研究未見任何報(bào)道。本研究通過對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的細(xì)胞活性以及對(duì)單核巨噬細(xì)胞 RAW264.7 的細(xì)胞增殖、凋亡的研究，來揭示蔓荊子黃素對(duì)免疫的調(diào)節(jié)作用。
