古朵資訊| ELISA實驗中標曲和樣本的顯色問題

  ELISA實驗是我們科研實驗中經(jīng)常使用的實驗方法，看似簡單其實有許多需要我們?nèi)プ⒁獾模裉旃哦渖锛夹g(shù)小編就和大家介紹下實驗中常見的標曲和樣本的顯色問題。

  一、標曲不顯色或顯色很弱，樣本顯色。

  溶解標準品以及倍比稀釋時，未渦旋震蕩或不夠充分。標準品溶解時，需要渦旋震蕩，以保證充分溶解。在做倍比稀釋時，也要渦旋震蕩以保證充分混勻。單純依靠移液器反復(fù)吹打，效率較低、效果也不一定好。

  二、標曲和樣本均不顯色。

  在孵育階段靜置在桌面上，這樣非常不利于抗原抗體之間的充分接觸，導(dǎo)致顯色偏弱。推薦孵育階段，使用ELISA專用的微孔板振蕩器，調(diào)至合適的頻率，使抗原抗體充分接觸，保證結(jié)合效果。

  如果排除上述原因，有可能是漏加了某個組分，如檢測抗體、酶等。所以在實驗過程中，一定要做好標記和記錄，或者使用添加染料的ELISA試劑盒。

  三、標曲顯色，樣本不顯色。

  到這種情況，很多人覺得是試劑盒問題，這其實是一個誤區(qū)。任何一種實驗方法，都有其局限性，當樣本中目的蛋白濃度極低或者樣本中干擾因素較強，就無法檢測到。目前ELISA仍然是蛋白檢測靈敏度的方法，與不同技術(shù)結(jié)合后，衍生出了多種類型的ELISA，提高了檢測靈敏度。如采用信號增強劑的高敏ELISA、ECL為底物的化學(xué)發(fā)光ELISA、采用熒光法檢測的ELISA、結(jié)合PCR擴增的免疫PCR等等。

  對于目的蛋白濃度特別低的樣本，可以嘗試用高敏ELISA，但這也并不意味著一定能檢測到樣本濃度，只能說可以提高樣本的可測率，并使結(jié)果加可靠。因為通常用普通ELISA檢測的樣本OD值都偏低，甚至低于標準品濃度的S7點，雖然可以計算得到數(shù)值，但實際上這個數(shù)值的可信度已經(jīng)降低了。而高敏ELISA可提高樣本OD值，使之盡量位于標曲范圍內(nèi)，得到的數(shù)值也加可信。

  四、標曲和樣本都顯色，但復(fù)孔的CV大。

  這個問題就跟移液器和實驗者的操作有關(guān)了。移液器的使用維護不規(guī)范，就會造成移液的誤差較大。實驗者自身的操作習(xí)慣、加樣的一致性對復(fù)孔的CV也有很大影響。個人的操作可以在空白板上練習(xí)移液動作，或者在幾十個離心管中加入相同體積的水，通過電子天平稱量，檢驗移液的度。同時還需練習(xí)加快加樣速度，減少從個樣本到后一個樣本加樣時間過長導(dǎo)致的差異。

  ELISA實驗中有關(guān)標曲和樣本的顯色問題主要就是以上4種，當然還會存在其他的問題，在這里就不一一介紹了，大家在操作過程中要細心謹慎，防止出現(xiàn)以上的問題。

  ELISA上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。古朵試劑盒