ELISA試劑盒試驗操作中影響結果的原因，及相應解決辦法

  古朵生物ELISA試劑盒試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。現(xiàn)將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質量,下面分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因，并給出相應的解決辦法。

  一、選擇試劑

  選擇質量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘.

  一、加樣

  可能原因：

  1. 血清或血漿標本分離不好即進行加樣;

  2)手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時);

  3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。

  解決辦法：

  2. 標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。2)加樣后及時放入孵箱。3)加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。4)如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。3. 標本較多時，請分批操作。

  三、孵育

  可能原因：

  1. 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底;2)孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底。

  解決辦法：

  2. 貼封片或加蓋;按說明步驟嚴格控制操作時間。

  二、洗板

  可能原因：

  1. 采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。2)采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不徹底;洗板針堵塞，抽吸不完全;洗板不暢，導致洗板效果差。3)反應板過多造成洗板等待時間長。

  解決辦法：

  2. 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;2)合理安排，或多用幾臺洗板機。

  五、顯色

  可能原因：

  1. 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;

  2. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。

  解決辦法：

  1. 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用;

  2. 加樣時保持顯色劑不外流;

  3. A、B液應避免接觸金屬器械。

  六、終止

  可能原因如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。

  七、讀板

  如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸;盡可能實現(xiàn)ELISA試劑盒檢測標準自動化，有效提高檢測質量。

  通蔚生物在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本，才能保證檢測質量。現(xiàn)在國內已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現(xiàn)ELISA試劑盒標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。

  ELISA試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術相關產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。