古朵生物：PBS和D-PBS緩沖溶液怎么配制?

  磷酸鹽緩沖液(簡稱PBS)的是生物化學(xué)中常用的一種阻礙溶液pH變化的緩沖溶液，這種由鹽溶液中含有氯化鈉，磷酸鹽，磷酸鹽，氯化鉀和磷酸鉀組成。組份濃度：137 mM 氯化鈉，2.7 mM 氯化鉀，10 mM 磷酸二氫鈉，2 mM 磷酸二氫鉀。本文總結(jié)了PBS和D-PBS溶液的配制方法。

  1. 常規(guī)PBS磷酸鹽緩沖液

  組成成份：

  磷酸二氫鉀 34 g

  1 mol/L氫氧化鈉溶液 175 ml

  蒸餾水 825 ml

  PH 7.2

  配制：

  先將磷酸鹽溶解于500 mL蒸餾水中，用1 mol/L氫氧化鈉溶液校正pH后，再用蒸餾水稀釋至1000 mL。

  稀釋液：

  取儲存液1.25 mL，用蒸餾水稀釋至1000 mL。分裝每瓶100 mL或每管10 mL，121 ℃高壓滅菌15 min。

  用途：主要用于一些化學(xué)實(shí)驗(yàn)中不影響實(shí)驗(yàn)反應(yīng)的情況下調(diào)節(jié)pH值，以便讓實(shí)驗(yàn)的化學(xué)反應(yīng)在佳條件下進(jìn)行。部分用于食品或是飼料行業(yè)加工，如食品或者飼料真菌毒素檢驗(yàn)中Elisa方法的洗板應(yīng)用或者食品微生物檢驗(yàn)中的稀釋緩沖液。

  2. PBS Buffer的配制具體步驟

  組份濃度：

  137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4

  配制量：1 L

  配制方法：

  (1)稱量下列試劑，置于1 L燒杯中。

  NaCl 8 g

  KCl 0.2 g

  Na2HPO4 1.42 g

  KH2PO4 0.27 g

  (2)向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?

  (3)滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。

  (4)高溫高壓滅菌后，室溫保存。

  注意：

  上述PBS Buffer中無二價陽離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

  3. D-PBS是杜氏磷酸緩沖液

  全稱為：Dulbecco's Phosphate Buffered Saline

  組分 分子量 濃度 (gm/L) 摩爾濃度 (mM)

  氯化鉀 (KCl) 75 0.20 2.67

  磷酸二氫鉀 (KH2PO4) 136 0.20 1.47

  氯化鈉 (NaCl) 58 8.00 138.00

  磷酸氫二鈉 (Na2HPO4) 142 1.15 8.10

  pH值為7.4。

  (1)杜氏磷酸鹽緩沖液(Dulbecco's Phosphate Buffered Saline，D-PBS)也是一種磷酸鹽緩沖液，與常規(guī)PBS的不同之處在于磷酸鹽的含量稍低些，并含有鈣鎂離子。D-PBS主要用于胚胎學(xué)方面的研究，多用于胚胎的沖洗液、凍存液和培養(yǎng)液。

  (2)D-PBS配方：氯化鈉8 g，氯化鉀0.2 g，磷酸氫二鈉1.15 g，磷酸二氫鉀0.2 g，氯化鈣0.1 g，含6個結(jié)晶水的氯化鎂0.1 g溶于1 L ddH2O中。

  (3)以上配方為含有鈣鎂離子的D-PBS，如不加氯化鈣和氯化鎂，即為無鈣鎂的D-PBS。

  (4)在以上配方的基礎(chǔ)上，還可以加入葡萄糖、丙酮酸鈉等，以利于培養(yǎng)物的生長。

  D-PBS是杜氏磷酸緩沖液，也是一種磷酸鹽緩沖液，與常規(guī)磷酸緩沖液大的不同點(diǎn)在于磷酸鹽的含量稍低些，根據(jù)是否含鈣鎂分為兩種即D-PBS w/鈣 & 鎂和D-PBS w/o 鈣

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