植物RNA提取試劑盒2.0是高品質(zhì)的RNA提取純化產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品僅用于生物化學(xué)研究方面，我公司專注于RNA提取純化產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的植物RNA提取試劑盒2.0質(zhì)量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括植物RNA提取試劑盒2.0(無氯fǎng柱式提取)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：植物RNA提取試劑盒2.0(無氯fǎng柱式提取)
英文名稱：Plant RNA Column extraction kit 2.0
產(chǎn)品貨號：BTN160907
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本試劑盒是無酚無氯fǎng柱式植物RNA提取試劑盒(BTN160906)的升級產(chǎn)品。不僅不需要氯fǎng處理，還解決了提取的植物總RNA中出現(xiàn)基因組DNA污染這一難題，提取的RNA通過PCR驗(yàn)證不含基因組DNA污染。

試劑盒特點(diǎn)：
1. 免酚和氯fǎng處理，操作安全可靠。
2. 簡單快速，處理一個樣品只需要約十分鐘。
3. RNA 純度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能夠有效去除大多數(shù)植物中的多糖污染。
4. 目前已測試過上百種植物。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA 合成等實(shí)驗(yàn)。
6. 高于進(jìn)口的柱式植物RNA提取產(chǎn)品。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	100ml
膜反應(yīng)液	2.5ml
RNase-free DNase(1U/μL)	0.5ml
RNA洗脫液	10ml

儲存條件：常溫運(yùn)輸，4℃保存，DNase低溫運(yùn)輸保存，有效期一年。

使用方法：
1. 估算組織細(xì)胞的用量。每次微量提取一般需要100-200mg植物葉片、或50-100mg植物種子、或200-500mg植物果實(shí)。
2. 先將新鮮植物組織剪切成小塊(保存在RNA保存液中的植物組織需用紙吸去RNA保存液體后再剪切成小塊)，放入10-15mL塑料離心管中，加入1mL溶液A，然后用勻漿器勻漿5-20秒。勻漿時會產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。也可以使用液氮硯磨法破碎植物組織，硯磨完后加入1mL溶液A。
注意：溶液A在4℃放置后可能會產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
3. 將勻漿物或硯磨物轉(zhuǎn)移至干凈的1.5mL塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片)。有的植物組織(比如果實(shí))含有大量水份，勻漿液會多于1mL，轉(zhuǎn)移時也只取1mL。
4.室溫12000～15000g離心3～5分鐘，管底沉淀為細(xì)胞破碎物。
5. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中。
6. 加入等體積的溶液B，充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生(對某些植物，屬于正?，F(xiàn)象)，千萬不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
7. 將一半的溶液(如果有沉淀，則先混勻)轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，13000-15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
8. 將剩下的一半溶液(如果有沉淀，則先混勻)轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，13000-15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 加0.7mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。再加0.3mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。一般樣品如此洗滌兩次即可，但如果在第7 步加入溶液B后有沉淀產(chǎn)生，則需要洗三次，每次加入的通用洗滌液的量分別為0.4、0.3和0.3mL。
10. 12000rpm室溫離心10秒以便去除殘留液體。此步很重要，否則殘留的通用洗柱液會抑制后續(xù)反應(yīng)中DNase的活性。
11. 將10μl(10 U)的RNase-free DNase 加入到50μl 37℃預(yù)熱的DNA膜反應(yīng)液中，吹打混勻配制成DNase工作液。
12. 將DNase工作液在37℃預(yù)熱1分鐘，然后全部加入到離心吸附柱中，室溫放置5分鐘。注意：5分鐘一般足夠降解大多數(shù)情況下的DNA污染。如果DNA 沒有徹底降解(可能由于樣品中殘留的雜質(zhì)抑制了DNase的活性)，此步的保溫時間可以適當(dāng)延長到10分鐘或15分鐘。
13. 直接在離心吸附柱中加0.7mL 通用洗柱液，蓋上蓋后顛倒數(shù)次混勻。
14. 12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
15. 再加0.3mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
16. 12000rpm室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇(通用洗柱液中的成分)會影響RNA的使用。
17. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free 收集管中，加入30-50μl RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
18. 13000-15000g室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
19. RNA 完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
20. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10μl RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量(濃度X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
21. RNA 純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。

根據(jù)您的關(guān)注的植物RNA提取試劑盒2.0(無氯fǎng柱式提取)，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：

貨號	名稱	規(guī)格
BTN111202	非凍型血液RNA保存液	100mL
BTN160906	植物RNA提取試劑盒(無酚無氯fǎng柱式提取)	50次
BTN80104	一站式miRNA柱式提取試劑盒	50次
BTN3290	RNase抑制劑(人源)(40U/μL)	2500U
BTN3110	氧釩核糖核苷復(fù)合物(RVC/VRC)	10mL
BTN60604	DEPC處理水	250mL
BTN130505	RNA溶解液	10mL

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名稱：病毒沉淀劑
貨號：BTN110810
規(guī)格：100mL
生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細(xì)小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長時間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點(diǎn)，本公司開發(fā)了本產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 能濃縮病毒100倍以上，適合各種病毒。
2. 比超速離心法、密度梯度離心分離法和過濾法更溫和，回收率更高，并且大部分病毒能保持活性，適合各種后續(xù)實(shí)驗(yàn)，包括轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)和核酸純化。
3. 比超速離心法和密度梯度離心分離法簡單，不需要大型離心機(jī)等設(shè)備。
4.適合水樣、細(xì)胞培養(yǎng)基上清和其他不含細(xì)胞的樣品。本產(chǎn)品100mL可以處理400mL含病毒的溶液，可以將病毒濃縮100倍以上。
5. 已經(jīng)成功用于coronaviruses 、rhabdoviruses 、parainfluenzaviruses 、respiratory syncytial virus、rubella virus、picornaviruses等病毒。
6. 對環(huán)境水樣，請不要使用本產(chǎn)品，而是使用水體病毒沉淀劑。

儲存條件：常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。

自備試劑：PBS緩沖液或TES緩沖液(用于重懸病毒)

使用方法：
注意：需要盡量減少含病毒溶液中蛋白的濃度。收集培養(yǎng)細(xì)胞分泌的病毒前，zuì好換上不含血清蛋白和其他蛋白成分的培養(yǎng)基。
1. 將培養(yǎng)細(xì)胞刮下，和培養(yǎng)基一起全部轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中，10000rpm 4℃離心20分鐘。轉(zhuǎn)移上清(含病毒)到新離心管中。如果培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)還有病毒顆粒，并且病毒顆?？梢缘挚箖鋈?，則可以把細(xì)胞凍融數(shù)次，釋放出包漿的病毒，然后再轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中，10000rpm 4℃離心20分鐘。轉(zhuǎn)移上清(含病毒)到新離心管中。如果病毒溶液不含細(xì)胞成分，則直接進(jìn)入下一步。
2.在含病毒的上清中加入1/4 總體積的本產(chǎn)品(4mL 病毒溶液則加1mL 本產(chǎn)品)，4℃冰箱中放置過夜或12小時以上。病毒在此期間將形成沉淀。
3. 10000rpm 4℃離心20分鐘收集病毒沉淀，盡可能棄掉所有上清(可以暫時保留上清，等確認(rèn)病毒濃縮成功后再丟棄)。
4. 將離心管放回離心機(jī)短暫離心數(shù)秒，再次小心去除殘留上清。
5. 將沉淀(病毒顆粒)溶于適量預(yù)冷的自備的緩沖液(如PBS緩沖液、TES緩沖液和培養(yǎng)基中，取決于后續(xù)實(shí)驗(yàn))，立即使用或者-20℃長期保存。

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