隨機(jī)引物法DNA探針標(biāo)記試劑盒的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的探針標(biāo)記及檢測(cè)產(chǎn)品，本制品僅用于生物化學(xué)研究方面，隨機(jī)引物法DNA探針標(biāo)記試劑盒是我司眾多優(yōu)質(zhì)探針標(biāo)記及檢測(cè)之一，質(zhì)量堪比同類(lèi)進(jìn)口產(chǎn)品，價(jià)格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷(xiāo)中，恭候您的咨詢(xún)訂購(gòu)。...

特別提示：包括隨機(jī)引物法DNA探針標(biāo)記試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：隨機(jī)引物法DNA探針標(biāo)記試劑盒
英文名稱(chēng)：Random Primer DNA Labeling Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN90603A
產(chǎn)品規(guī)格：5次

本試劑盒是基于Feinberg和Vogelstein發(fā)明的隨機(jī)引物標(biāo)記法而開(kāi)發(fā)出來(lái)的即用型DNA探針標(biāo)記試劑盒，標(biāo)記過(guò)程由雙鏈DNA熱變性、隨機(jī)引物與單鏈DNA結(jié)合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探針并摻入標(biāo)記的核苷酸三步組成，可用下面的示意圖表示：

本產(chǎn)品對(duì)Feinberg和Vogelstein經(jīng)典方法進(jìn)行了改良。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 提供的標(biāo)記反應(yīng)液整合了除酶和模板外的所有成分，簡(jiǎn)化了反應(yīng)加樣步驟，提高了標(biāo)記反應(yīng)的可重復(fù)性。
2. 使用無(wú)外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已標(biāo)記DNA探針不會(huì)被酶降解。
3.快速，zuì快1小時(shí)即可完成標(biāo)記反應(yīng)。
4. 得到的DNA探針比活性高(如果是同位素，可以達(dá)到109cpm/μg DNA)，檢測(cè)靈敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可)，DNA可以是各種形狀(線(xiàn)狀和環(huán)狀)的、也可以是單鏈或雙鏈的，長(zhǎng)度在100bp以上均可。
6. 得到的探針長(zhǎng)度在200-400nt之間，可以用于Southern雜交、Northern雜交、原位雜交、菌落和斑點(diǎn)印跡雜交等。
7. 提供三種標(biāo)記選擇，其中BTN90603A可用于各種同位素標(biāo)記和其他任何非同位素標(biāo)記，但需自備標(biāo)記底物；BTN90603B和BTN90603C可分別用于生物素和dì高辛標(biāo)記，不需自備標(biāo)記底物。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
2×A型標(biāo)記反應(yīng)液(自備標(biāo)記物型)	50μl(僅A型有)
2×B型標(biāo)記反應(yīng)液(生物素型)	50μl(僅B型有)
2×C型標(biāo)記反應(yīng)液(DIG型)	50μl(僅C型有)
dATP,2mM	10μL(僅A型有)
dTTP,2mM	10μL(僅A型有)
dGTP,2mM	10μL(僅A型有)
dCTP,2mM	10μL(僅A型有)
Klenow exo-聚合酶(2U/μL)	5μl
超純水	1ml
說(shuō)明書(shū)	1份

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在一干凈的硅化的塑料離心管中加入下列成分：

成分	用量
模板DNA	50-150ng
2×標(biāo)記反應(yīng)液(ABC三種之一)	10μl
超純水	補(bǔ)水到15μl

注意：非同位素標(biāo)記物由于疏水性強(qiáng)，容易與常用的塑料離心管表面非特異性結(jié)合，所以一定要使用硅化的塑料離心管。模板DNA并非越多越好，因?yàn)槟０鍟?huì)在雜交反應(yīng)中跟標(biāo)記的探針雜交，競(jìng)爭(zhēng)性地抑制探針跟靶分子的雜交。
2. 沸水浴5-10分鐘，或在PCR儀上100℃加熱5-10分鐘使DNA模版充分變性，立即放冰上待用。注意：如果PCR儀器不能設(shè)置到100℃，99℃加熱5分鐘也可。
3.高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底，根據(jù)試劑盒類(lèi)型加入下列成份：

試劑盒類(lèi)型	成分及用量
BTN90603A型	dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL，濃度均為2mM) 自備的2mM dTTP/標(biāo)記dUTP混合物(見(jiàn)注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶
BTN90603B型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超純水
BTN90603C型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超純水

注：上表中的dTTP/標(biāo)記dUTP混合物中dTTP和標(biāo)記的dUTP的總濃度為2mM(在20μL體系中混合液的終濃度為0.1mM，dTTP與生物素或DIG標(biāo)記的dUTP的比例zuì好為65:35)。由于空間阻礙，并非標(biāo)記生物素或DIG標(biāo)記的dUTP越多靈敏度越高，一般dTTP與標(biāo)記dUTP的比例在65：35為zuì佳。但如果使用自備的其他標(biāo)記核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl標(biāo)記的dUTP，則用戶(hù)需要自己摸索其與dTTP之間的zuì佳比例，如果使用32P標(biāo)記的dUTP，則比活zuì好為3000Ci/mmol，濃度為好為10uCi/μL，并且不需要加入dTTP。
4. 輕柔吹打混勻。如有液滴沾在管壁上，高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底。
5. 37℃保溫1-20小時(shí)。標(biāo)記效率跟模版量和保溫時(shí)間相關(guān)，具體見(jiàn)下表：

模版DNA用量	1小時(shí)后探針合成量	20小時(shí)后探針合成量
10ng	80ng	900ng
30ng	150ng	1.35μg
100ng	350ng	1.65μg
300ng	750ng	2.2μg
1μg	1.3μg	2.6μg
3μg	1.6μng	2.6μg

6. 加1μl自備的0.5M EDTA(pH8.0)終止反應(yīng)，立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加熱100℃ 5分鐘使DNA探針變性成單鏈，然后直接加入到雜交反應(yīng)液中即可。如果電泳檢測(cè)，標(biāo)記產(chǎn)物將是彌散狀態(tài)。
 注意：本方法標(biāo)記核苷酸摻入率高，因此可以不經(jīng)純化直接使用。如果需要純化，注意不要用酚抽提法純化非同位素(生物素、DIG和其他等)標(biāo)記的DNA探針，因?yàn)檫@些標(biāo)記分子疏水性強(qiáng)，能使標(biāo)記的DNA進(jìn)入疏水的有機(jī)相而丟失，但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另購(gòu)非同位素探針柱式純化試劑盒)。對(duì)比活高的同位素探針，由于其其不穩(wěn)定，因此應(yīng)該立即使用，不要長(zhǎng)久放置。

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名稱(chēng)：隨機(jī)引物法DNA探針標(biāo)記試劑盒
貨號(hào)：BTN90603A
規(guī)格：5次
本試劑盒是基于Feinberg和Vogelstein發(fā)明的隨機(jī)引物標(biāo)記法而開(kāi)發(fā)出來(lái)的即用型DNA探針標(biāo)記試劑盒，標(biāo)記過(guò)程由雙鏈DNA熱變性、隨機(jī)引物與單鏈DNA結(jié)合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探針并摻入標(biāo)記的核苷酸三步組成，可用下面的示意圖表示：

本產(chǎn)品對(duì)Feinberg和Vogelstein經(jīng)典方法進(jìn)行了改良。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 提供的標(biāo)記反應(yīng)液整合了除酶和模板外的所有成分，簡(jiǎn)化了反應(yīng)加樣步驟，提高了標(biāo)記反應(yīng)的可重復(fù)性。
2. 使用無(wú)外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已標(biāo)記DNA探針不會(huì)被酶降解。
3.快速，zuì快1小時(shí)即可完成標(biāo)記反應(yīng)。
4. 得到的DNA探針比活性高(如果是同位素，可以達(dá)到109cpm/μg DNA)，檢測(cè)靈敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可)，DNA可以是各種形狀(線(xiàn)狀和環(huán)狀)的、也可以是單鏈或雙鏈的，長(zhǎng)度在100bp以上均可。
6. 得到的探針長(zhǎng)度在200-400nt之間，可以用于Southern雜交、Northern雜交、原位雜交、菌落和斑點(diǎn)印跡雜交等。
7. 提供三種標(biāo)記選擇，其中BTN90603A可用于各種同位素標(biāo)記和其他任何非同位素標(biāo)記，但需自備標(biāo)記底物；BTN90603B和BTN90603C可分別用于生物素和dì高辛標(biāo)記，不需自備標(biāo)記底物。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
2×A型標(biāo)記反應(yīng)液(自備標(biāo)記物型)	50μl(僅A型有)
2×B型標(biāo)記反應(yīng)液(生物素型)	50μl(僅B型有)
2×C型標(biāo)記反應(yīng)液(DIG型)	50μl(僅C型有)
dATP,2mM	10μL(僅A型有)
dTTP,2mM	10μL(僅A型有)
dGTP,2mM	10μL(僅A型有)
dCTP,2mM	10μL(僅A型有)
Klenow exo-聚合酶(2U/μL)	5μl
超純水	1ml
說(shuō)明書(shū)	1份

儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在一干凈的硅化的塑料離心管中加入下列成分：

成分	用量
模板DNA	50-150ng
2×標(biāo)記反應(yīng)液(ABC三種之一)	10μl
超純水	補(bǔ)水到15μl

注意：非同位素標(biāo)記物由于疏水性強(qiáng)，容易與常用的塑料離心管表面非特異性結(jié)合，所以一定要使用硅化的塑料離心管。模板DNA并非越多越好，因?yàn)槟０鍟?huì)在雜交反應(yīng)中跟標(biāo)記的探針雜交，競(jìng)爭(zhēng)性地抑制探針跟靶分子的雜交。
2. 沸水浴5-10分鐘，或在PCR儀上100℃加熱5-10分鐘使DNA模版充分變性，立即放冰上待用。注意：如果PCR儀器不能設(shè)置到100℃，99℃加熱5分鐘也可。
3.高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底，根據(jù)試劑盒類(lèi)型加入下列成份：

試劑盒類(lèi)型	成分及用量
BTN90603A型	dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL，濃度均為2mM) 自備的2mM dTTP/標(biāo)記dUTP混合物(見(jiàn)注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶
BTN90603B型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超純水
BTN90603C型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超純水

注：上表中的dTTP/標(biāo)記dUTP混合物中dTTP和標(biāo)記的dUTP的總濃度為2mM(在20μL體系中混合液的終濃度為0.1mM，dTTP與生物素或DIG標(biāo)記的dUTP的比例zuì好為65:35)。由于空間阻礙，并非標(biāo)記生物素或DIG標(biāo)記的dUTP越多靈敏度越高，一般dTTP與標(biāo)記dUTP的比例在65：35為zuì佳。但如果使用自備的其他標(biāo)記核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl標(biāo)記的dUTP，則用戶(hù)需要自己摸索其與dTTP之間的zuì佳比例，如果使用32P標(biāo)記的dUTP，則比活zuì好為3000Ci/mmol，濃度為好為10uCi/μL，并且不需要加入dTTP。
4. 輕柔吹打混勻。如有液滴沾在管壁上，高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底。
5. 37℃保溫1-20小時(shí)。標(biāo)記效率跟模版量和保溫時(shí)間相關(guān)，具體見(jiàn)下表：

模版DNA用量	1小時(shí)后探針合成量	20小時(shí)后探針合成量
10ng	80ng	900ng
30ng	150ng	1.35μg
100ng	350ng	1.65μg
300ng	750ng	2.2μg
1μg	1.3μg	2.6μg
3μg	1.6μng	2.6μg

6. 加1μl自備的0.5M EDTA(pH8.0)終止反應(yīng)，立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加熱100℃ 5分鐘使DNA探針變性成單鏈，然后直接加入到雜交反應(yīng)液中即可。如果電泳檢測(cè)，標(biāo)記產(chǎn)物將是彌散狀態(tài)。
 注意：本方法標(biāo)記核苷酸摻入率高，因此可以不經(jīng)純化直接使用。如果需要純化，注意不要用酚抽提法純化非同位素(生物素、DIG和其他等)標(biāo)記的DNA探針，因?yàn)檫@些標(biāo)記分子疏水性強(qiáng)，能使標(biāo)記的DNA進(jìn)入疏水的有機(jī)相而丟失，但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另購(gòu)非同位素探針柱式純化試劑盒)。對(duì)比活高的同位素探針，由于其其不穩(wěn)定，因此應(yīng)該立即使用，不要長(zhǎng)久放置。

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BTN91104B	Denhardt溶液(非同位素探針)	250mL

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