北京百奧萊博供應(yīng)的血小板膜蛋白提取試劑盒用于科研試驗，我公司專注于蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的血小板膜蛋白提取試劑盒質(zhì)量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括血小板膜蛋白提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：血小板膜蛋白提取試劑盒
英文名稱：Platelet membrane protein extraction kit
產(chǎn)品貨號：HR8023
產(chǎn)品規(guī)格：50T|100T

血小板膜蛋白提取試劑盒適用于從各種動物血小板中提取膜蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。本試劑盒含有的獨特配方能夠有效溶解膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。
本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。
本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。
本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。
本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用我公司其他貨號的試劑盒。也可以將zuì后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理(相關(guān)產(chǎn)品HR0389)。
我公司可以提供針對動物細(xì)胞、組織、植物、真菌、酵母、微生物、液體、土壤等不同樣本的蛋白提取試劑盒，包含用于非雙向電泳和雙向電泳等不同下游應(yīng)用的試劑盒以及含去垢劑成分和不含去污劑成分的蛋白提取試劑盒，專用于蛋白質(zhì)譜檢測的試劑盒等總計300多種蛋白提取試劑盒可供選擇。我公司還可以提供針對動物、植物等不同樣本的細(xì)胞核、線粒體、溶酶體、葉綠體等不同細(xì)胞器的提取試劑盒。

儲存條件：蛋白提取液2-8℃保存；溶解液2-8℃保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存。
【注】：
●蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前請仔細(xì)閱讀產(chǎn)品說明書 ※ ※ ※
使用限制：本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。
產(chǎn)品更新：我公司會更新或升級產(chǎn)品，以優(yōu)化和增強(qiáng)其使用性能，產(chǎn)品說明書會進(jìn)行相應(yīng)的版本更新。使用產(chǎn)品時，請參照隨產(chǎn)品附帶的說明書，不要參照網(wǎng)上下載的說明書，可能是不同的版本。需要zuì新電子版說明書時可以在收到產(chǎn)品后發(fā)郵件索取。
使用安全：使用時需要合適的實驗室外套，一次性手套。避免皮膚或粘膜與試劑接觸。如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。

注意事項：
1．正式實驗前請選取幾個樣本做預(yù)實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得zuì佳實驗效果。
2．螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
3．禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
4．樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
5．zuì好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底清除殘留清潔劑。
6．實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

產(chǎn)品特點：
1．使用方便，蛋白提取的時間約1小時。
2．含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3．紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：
儀器：
●離心機(jī)● 振蕩器● 渦旋混勻器● 移液器●冰箱●冰盒
試劑：● Tyrode"s solution/CGS緩沖液/生理鹽水/ PBS等
耗材：●離心管
● 吸頭

使用方法：

使用注意事項：
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
● 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
●蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

1．提取液準(zhǔn)備：
每500μl冷的蛋白提取液A中加入2μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
每500μl蛋白溶解液C中加入2μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
【注】：
● 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。
2.取1-5ml ACD抗凝血，室溫200g離心10分鐘。
【注】：
●離心力在180-220g 均可，不要大于250g。
● zuì好用盡可能新鮮的血樣。
3.收集上層血漿，棄下層血液細(xì)胞沉淀。
【注】：
● 如果血漿層與紅細(xì)胞層之間形成白膜，小心吸取白膜層加入上層血漿。
4.上層血漿室溫3000g離心15分鐘，棄上清，收集沉淀。
【注】：
● 如果對血小板低活化程度要求較高，血小板需要進(jìn)行再培養(yǎng)等處理，此步驟離心力可以降低到2000g，離心時間縮短至5分鐘。
● 降低離心力和縮短離心時間會降低蛋白回收率。
5.沉淀中加入500μl提取液B 洗滌一次，3000g離心15分鐘，棄上清，收集沉淀。
6．沉淀中加入300-500μl冷的蛋白提取液A，充分混勻后，在4℃條件下振蕩30-50分鐘。
【注】：
● 必須在2-8℃條件下振蕩。
●用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體有輕微晃動即可。
● 沒有振蕩條件可以不振蕩，2-8℃靜置，稍微延長處理時間即可，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。
7.在4℃，12000g條件下離心10分鐘，取上清。
8.在37℃水浴10分鐘。
9.在37℃,1000g離心3分鐘。
【注】：
● 此步驟必須37℃條件下離心。
● 如果離心機(jī)不可控溫，可以不離心，延長上一步驟水浴時間，至溶液澄清，分層清晰即可?；蛘咴谑覝貤l件下離心，縮短離心時間至1分鐘。
10.此時液體分為2 層，小心移除上層溶液，留管底部的下層，大約30-50μl液體。
【注】：
● 下層為粘稠狀液體。
11.用1-2倍體積的膜蛋白溶解液C溶解該液體，即得血小板膜蛋白樣品。
12.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br /> 【注】：
● 建議用BCA 法進(jìn)行蛋白定量。相關(guān)產(chǎn)品：HR0329。
●蛋白樣品－80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。
常見問題分析：
●蛋白濃度低？
血小板膜蛋白豐度較低，在條件允許的情況下，需要盡可能加大血小板的上樣量。
處理部分組織樣本時可能沒有裂解完全，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑的處理時間即可。zuì好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
●用什么方法定量蛋白？
建議用BCA 法。不適合用Bradford 法，因為試劑A中含有干擾Bradford 法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford 法定量。
● 提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

根據(jù)您的關(guān)注的血小板膜蛋白提取試劑盒，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：



名稱：動物細(xì)胞裂解液B(變性)
貨號：BTN80807B
規(guī)格：100mL
本產(chǎn)品含有多種細(xì)胞裂解成分和蛋白酶抑制成分，可以在非變性或變性條件下迅速裂解組織或培養(yǎng)細(xì)胞，使之釋放出細(xì)胞內(nèi)蛋白，用于后續(xù)實驗。

產(chǎn)品特點：
1.快速裂解，多種裂解成分經(jīng)過精心優(yōu)化，能快速使細(xì)胞裂解。
2. 非變性(BTN80807A)產(chǎn)品能zuì大程度地保留蛋白天然結(jié)構(gòu)和功能，主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀，還可以用于蛋白活性檢測(信號傳遞研究和酶動力學(xué)檢測)和Western Blot等各種后續(xù)實驗。
3.變性(BTN80807B)裂解細(xì)胞的效率更高，主要用于對抗原空間構(gòu)型不敏感的免疫共沉淀實驗，還可以用于Western Blotting。
4.適用于培養(yǎng)細(xì)胞(包括懸浮細(xì)胞)和新鮮組織。

儲存條件：常溫運輸、4℃保存，有效期一年。

注意事項：
1. 如果在本產(chǎn)品中額外再加入終濃度為1×的、新鮮配制的蛋白酶抑制劑復(fù)合物，可以更有效地抑制蛋白酶活性，防止蛋白降解。
2. 如果用于信號傳遞研究，zuì好在本產(chǎn)品中加入終濃度為1×的、新鮮配制的磷酸酶抑制劑復(fù)合物。
3. 整個裂解步驟都要在冰浴或4℃操作。本產(chǎn)品和PBS 均需預(yù)先冷卻。
4. 本產(chǎn)品所含有較高濃度的去垢劑會對Bradford蛋白濃度測定有較大影響，因此只能使用BCA法測定蛋白濃度。

使用方法：

一：處理貼壁的培養(yǎng)細(xì)胞
1. 去除貼壁細(xì)胞培養(yǎng)液，用冰浴預(yù)冷的PBS 洗兩遍，去盡殘留的PBS。
2. 將培養(yǎng)板放置在冰上待用。
3. 按每106個細(xì)胞加入0.1mL 本產(chǎn)品(或100mm 貼壁細(xì)胞加1mL 本產(chǎn)品)的比例向培養(yǎng)板中加入適量的本產(chǎn)品(按此比例裂解得到的裂解物的蛋白濃度約在5-10mg/mL 之間)。
 注意：裂解效率跟細(xì)胞數(shù)量和本產(chǎn)品用量的比例密切相關(guān)。一般情況下6孔板的單孔(1～2×106細(xì)胞)需要0.1～0.2mL本產(chǎn)品；25 cm2培養(yǎng)瓶(3～6×106細(xì)胞)需要0.3~0.6mL；75 cm2培養(yǎng)瓶(1～2×107細(xì)胞)需要1～2mL。對于特別大或特別小的細(xì)胞，需要用戶摸索zuì佳用量。
4. 冰上放置10-30分鐘(zuì佳時間跟細(xì)胞系相關(guān))，其間偶爾輕輕搖晃或用槍頭輕輕吹打。
5. 將細(xì)胞培養(yǎng)板傾斜使上清液匯集在一端，并將其全部轉(zhuǎn)移到一個新的1.5mL塑料離心管中。
6. 15000×g，4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到一個新的1.5mL塑料離心管中，放置在冰上待用或放-80℃長期保存。注意：如果用于免疫沉淀，zuì好新鮮使用。
7. 用前zuì好先測定上清液的蛋白濃度，然后再進(jìn)行后續(xù)的電泳、Western或免疫沉淀操作。

二：處理懸浮細(xì)胞
1. 400×g，4℃離心10分鐘收集懸浮細(xì)胞，棄上清。
2. 用等體積的預(yù)冷PBS 洗滌細(xì)胞沉淀兩遍，步驟同步。
3. 按每106個細(xì)胞加入0.1mL 本產(chǎn)品的比例加入本產(chǎn)品，充分懸浮細(xì)胞。
4. 冰上放置15分鐘裂解細(xì)胞，期間偶爾輕柔震蕩。
5. 15000×g，4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到一個新的1.5mL塑料離心管中。為避免吸取到細(xì)胞沉淀，zuì好留20-40μL液體不取。
6. 將上清液放置在冰上待用或放-80℃長期保存。注意：如果用于免疫沉淀，zuì好新鮮使用。
7. 使用前zuì好先測定上清液的蛋白濃度，然后再進(jìn)行后續(xù)的電泳、Western或免疫沉淀操作。

三：處理組織塊
1. 稱量組織塊，用毛玻片或玻璃勻漿器研磨或勻漿，用5-10倍體積的、預(yù)冷的PBS洗兩次(包括沖洗器材)。
2. 將勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管中，1500g、4℃離心5分鐘后棄上清。
3. 按每50mg 組織加入0.2mL 本產(chǎn)品的比例加入預(yù)冷的本產(chǎn)品，吹打混勻，放置冰上。
4. 每隔5分鐘振蕩器輕柔振蕩一次，共4次。
5. 15000×g、4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到一個新的1.5mL塑料離心管中，放置在冰上待用或放-80℃長期保存。注意：如果用于免疫沉淀，zuì好新鮮使用。
6. 使用前zuì好先測定上清液的蛋白濃度，然后再進(jìn)行后續(xù)的電泳、Western或免疫沉淀操作。

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