蠟樣芽孢桿菌單重?zé)晒釶CR檢測試是高品質(zhì)的細(xì)菌PCR檢測試劑盒產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科研試驗(yàn)，我公司專注于細(xì)菌PCR檢測試劑盒產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的蠟樣芽孢桿菌單重?zé)晒釶CR檢測試質(zhì)量可靠，批間差小，且價(jià)格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括蠟樣芽孢桿菌單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：蠟樣芽孢桿菌單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
英文名稱：Fluorescent PCR detection kit for Bacillus cereus
產(chǎn)品貨號(hào)：SYA011
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒

一、簡介：
本試劑盒用一對(duì)蠟樣芽胞桿菌特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對(duì)蠟樣芽胞桿菌的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

二、用途：
本試劑盒適用于檢測水樣糞便、疑似污染的水、食物等樣本中的蠟樣芽胞桿菌(BC)，用于蠟樣芽胞桿菌(BC)感染的輔助診斷，其檢測結(jié)果僅供參考。

三、試劑盒組成：(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
BC反應(yīng)液(BC-qPCR MIX) 1管 672μL/管
核酸提取液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
陰性對(duì)照(NTC) 1管 50μL/管
BC陽性對(duì)照(BC-PTC) 1管 50μL/管

四、儲(chǔ)存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為12個(gè)月。

五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。

六、樣品的采集與DNA提取
6.1 樣品的采集
水樣便取0.5-1mL；疑似污染的食物取1g。
6.2 樣品前處理
水樣便13000 rpm離心 2min，去盡上清；疑似污染的食物用手術(shù)剪剪碎混勻后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL于1.5mL滅菌離心管中；疑似污染的水直接取100μL。
6.3 DNA提取
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
對(duì)上述處理好的樣本加入等體積核酸提取液(固體標(biāo)本加入50μL核酸提取液)，100℃恒溫處理10min，13000rpm離心5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
 注：陽性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對(duì)照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對(duì)照。

七、檢測步驟
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

八、結(jié)果分析
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測結(jié)果?；€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
（1） 陰性對(duì)照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
（2） 陽性對(duì)照(BC-PTC)：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
（3） 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則，此次試驗(yàn)視為無效。
8.3 結(jié)果判定
（2） 在試驗(yàn)成立的條件下，Ct值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線，表明BC核酸陽性。
（3） Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明BC核酸陰性。
（4） 如果Ct值>35，判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
（5） 對(duì)于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行BC 檢測。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽性，表明BC核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項(xiàng)：
（1） 初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
（2） 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
（3） PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。


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貨號(hào)	名稱	規(guī)格
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名稱：沙門氏菌單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
貨號(hào)：SYA002
規(guī)格：48次/盒
一、簡介
沙門氏菌(Salmonella)可引發(fā)人類、家畜以及野生禽獸不同形式的疾病。感染沙門氏菌的人或帶菌者的糞便污染食品，可使人發(fā)生食物中毒。據(jù)統(tǒng)計(jì)在各國的種類細(xì)菌性食物中毒中，沙門氏菌引起的食物中毒常列榜。本方法為熒光PCR檢測方法，反應(yīng)在同一管內(nèi)連續(xù)進(jìn)行，操作簡單，并有效防止了污染，能對(duì)樣品中或預(yù)培養(yǎng)液中的沙門氏菌進(jìn)行快速檢測，具有特異性高、敏感性強(qiáng)和操作簡便的特點(diǎn)。沙門氏菌的探針報(bào)告基團(tuán)為FAM，淬滅基團(tuán)為None。

二、用途
該試劑盒適合于增菌培養(yǎng)物、疑似病料及食品中沙門氏菌的檢測。

三、試劑盒組成(50T/Kit)
組份 數(shù)量 規(guī)格
沙門氏菌熒光qPCR反應(yīng)液(Sal-qPCR MIX) 1管 750μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
陰性對(duì)照(NTC) 1管 50μL/管
陽性對(duì)照(Sal-PTC) 1管 50μL/管

四、熒光PCR儀器適用范圍
ABI系列，Bio-Rad系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。

五、儲(chǔ)存條件及有效期：
本試劑盒于-18℃以下保存，有效期為6個(gè)月。

六、樣品采集與DNA提取
6.1 樣品采集
6.1.1 食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品安家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)》(GB 4789.4-2010)要求進(jìn)行。
6.1.2 糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
6.1.3 病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
 注：上述樣品建議經(jīng)過增菌后，收集培養(yǎng)物用于檢測。
6.2 DNA提取(用戶可根據(jù)需要選擇商業(yè)化DNA提取試劑盒)
6.2.1 培養(yǎng)物：取培養(yǎng)物50μL(培養(yǎng)至一定濁度)或者挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
6.2.2 糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
6.2.3 其他液體標(biāo)本：取標(biāo)本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。
 注：陽性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對(duì)照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對(duì)照。

七、檢測步驟：
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光qPCR反應(yīng)液(Sal-qPCR MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 15μL N×15μL
向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品/陰性對(duì)照(NTC)/陽性對(duì)照(Sal-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。

八、結(jié)果分析
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測結(jié)果。基線和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
（1） 陰性對(duì)照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
（2） 陽性對(duì)照(Sal-PTC)：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
（3） 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則，此次試驗(yàn)視為無效。
8.3 結(jié)果判定
（1） 在試驗(yàn)成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明Sal核酸陽性。
（2） Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明Sal核酸陰性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
（4） 對(duì)于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行Sal qPCR檢測。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽性，表明Sal核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項(xiàng)：
（1） 初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
（2） 所有使用的離心管應(yīng)高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
（3） PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。


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