傳統(tǒng)的DPH探針可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，我司試劑盒膜示蹤熒光探針TMA-DPH 不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，因此TMA-DPH 探針較DPH 探針能更準(zhǔn)確的反應(yīng)膜脂流動(dòng)性，本探針的最大激發(fā)波長(zhǎng)為355nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為430nm。...

細(xì)胞膜流動(dòng)性(fluidity)TMA-DPH熒光檢測(cè)試劑盒

 

產(chǎn)品編號(hào)：HR0954

產(chǎn)品組成：

保存條件：

2-8℃避光。長(zhǎng)期-20℃避光保存。染色液避免反復(fù)凍融，需要長(zhǎng)期保存可以分裝后-20℃保存。有效期1年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

膜的流動(dòng)性是生物膜結(jié)構(gòu)的基本特征之一，主要指膜脂肪酸鏈部分及膜蛋白的運(yùn)動(dòng)狀態(tài)。膜脂類分子在相變溫度以上條件下主要有側(cè)向擴(kuò)散、旋轉(zhuǎn)、左右搖擺、伸縮振蕩、翻轉(zhuǎn)及異化運(yùn)動(dòng)等方式。膜蛋白的運(yùn)動(dòng)方式大體分為側(cè)向及旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)，主要受脂質(zhì)雙分子層的影響。脂肪酸不飽和鍵含量和鏈的長(zhǎng)度明顯影響著膜脂流動(dòng)性，不飽和鍵的存在會(huì)降低膜脂分子間排列的有序性，從而增加膜的流動(dòng)性，短鏈能減低脂肪酸鏈尾部相互作用，在相變溫度下，不易于凝集，此外，脂肪酸烴鏈圍繞C- C鍵由全反式構(gòu)型到歪扭(CAUCHE)的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)運(yùn)動(dòng)，也可使流動(dòng)性加大。

生物膜適宜的流動(dòng)性是體現(xiàn)生物膜正常功能的必要條件，在一定范圍內(nèi)，膜流動(dòng)性增加，有利于膜中酶分子的擴(kuò)散和旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)，使酶活性增加。一些載體蛋白分子的運(yùn)動(dòng)性也取決于膜中脂類分子的流動(dòng)性。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤對(duì)化療藥物產(chǎn)生的耐藥性主要與細(xì)胞膜P 糖蛋白過(guò)度表達(dá)谷胱甘肽及其相關(guān)酶系活性改變有關(guān)，也有許多研究表明耐藥細(xì)胞膜流動(dòng)性較親代敏感細(xì)胞明顯增加。另有實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)腹水癌細(xì)胞的惡性程度隨著膜流動(dòng)性的增加而增加，白血病及轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞的膜流動(dòng)性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于非轉(zhuǎn)移細(xì)胞。因此，對(duì)敏感及耐藥的腫瘤細(xì)胞膜流動(dòng)性的監(jiān)測(cè)有著重要的意義。

膜流動(dòng)性的測(cè)定方法主要有熒光探針標(biāo)記，電子自旋共振以及差示掃描量熱法，x 線衍射，棱碰共振等。

我司TMA-DPH試劑盒是利用TMA-DPH測(cè)定膜流動(dòng)性的熒光探針?lè)ǎ谥鞍准捌漕愃葡到y(tǒng)的單分子層動(dòng)力學(xué)研究中特別有用。DPH 及其衍生物（例如TMA-DPH）都呈圓柱形，會(huì)發(fā)生基于按長(zhǎng)分子軸線平行排列而產(chǎn)生發(fā)射熒光向偶極躍遷。例如，它們對(duì)由于周?chē)愊嗷プ饔枚鴮?dǎo)致的再定位非常敏感。它們廣泛地被用于旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)研究中的熒光偏振分析。

傳統(tǒng)的DPH探針可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，我司試劑盒膜示蹤熒光探針TMA-DPH 不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，因此TMA-DPH 探針較DPH 探針能更準(zhǔn)確的反應(yīng)膜脂流動(dòng)性，本探針的最大激發(fā)波長(zhǎng)為355nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為430nm。

細(xì)胞膜流動(dòng)性(fluidity)TMA-DPH熒光檢測(cè)試劑盒試劑盒以外自備試劑耗材和儀器：

● 含有偏振檢測(cè)裝置的設(shè)備：熒光分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀 ● 離心機(jī) ● HBSS(無(wú)酚紅) ● PBS
使用注意事項(xiàng)：

● 螺旋蓋微量管裝試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

● 染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)在室溫時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否則容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

● 細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

● 染色后立即進(jìn)行分析。

● 標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整，在每次實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先確定最佳條件。

● 必須使用細(xì)胞熒光檢測(cè)專用的黑色細(xì)胞培養(yǎng)板。

● 以下步驟僅供參考。請(qǐng)根據(jù)實(shí)際實(shí)驗(yàn)方案實(shí)際或者參考文獻(xiàn)實(shí)驗(yàn)。

使用方法：

1、染色工作液的配制：

用稀釋液稀釋TMA-DPH 探針1000倍-10000倍，配制成TMA-DPH染色工作液。

【注】：

●也可以不用試劑盒中的稀釋液，直接用HBSS或無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋即可。

●使用前做預(yù)實(shí)驗(yàn)在推薦濃度范圍內(nèi)測(cè)試選定最佳濃度。

●推薦該探針加載濃度在1000-5000倍稀釋，具體的使用濃度需根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行優(yōu)化。

2、用染色工作液重懸細(xì)胞，在37℃孵育15-30分鐘。

3、用pH7.4 HBSS或20mM HEPES或PBS洗滌細(xì)胞1次。

4、用pH7.4 HBSS或20mM HEPES或PBS重懸細(xì)胞。

5、用該細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng) 355nm，發(fā)射波長(zhǎng)430nm。

按下列公式計(jì)算熒光偏振度P：

P=（I_VV-GI_VH）/(I_VV+GI_VH)

其中校正因子G=I_HV/I_HH

細(xì)胞膜流動(dòng)性(fluidity)TMA-DPH熒光檢測(cè)試劑盒式中：

I_VV:起偏和檢偏器光軸同為垂直方向時(shí)測(cè)得的熒光強(qiáng)度;

I_VH:起偏和檢偏器光軸分別為垂直和水平方向時(shí)測(cè)得的熒光強(qiáng)度。

I_HV:起偏和檢偏器光軸分別為水平和垂直方向時(shí)測(cè)得的熒光強(qiáng)度;

I_HH:起偏和檢偏器光軸同為水平方向時(shí)測(cè)得的熒光強(qiáng)度。

P值越大,流動(dòng)性越?。籔值越小，流動(dòng)性越大。

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