一站式DNA尿素-PAGE電泳套由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研目的，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價(jià)格，深為用戶稱道，了解更多一站式DNA尿素-PAGE電泳套等核酸電泳和回收產(chǎn)品請(qǐng)聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括一站式DNA尿素-PAGE電泳套裝在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：一站式DNA尿素-PAGE電泳套裝
英文名稱：One-Stop DNA Urea-PAGE Pack
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN90317
產(chǎn)品規(guī)格：30次

本品是專門用于DNA 尿素-PAGE電泳的一站式試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.一站式，即開即用，用戶不需單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分，十分方便。用戶不需要單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分。
2.可用于DNA 測序、AFLP、DDRT、TGGE和RNase 保護(hù)實(shí)驗(yàn)等。
3. 安全，免去了實(shí)驗(yàn)人員接觸粉末狀的劇毒物品丙烯酰胺。
4.電泳后可直接用于銀染、EB染色等實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品組成：

成分	規(guī)格	保存
電泳級(jí)尿素	210g	常溫
電泳級(jí)丙烯酰胺	77.34g	常溫
電泳級(jí)甲叉雙丙烯酰胺	2.67g	常溫
10×TBE電泳液	250ml	常溫
電泳級(jí)TEMED	1.5ml	4℃，避光
電泳級(jí)過硫酸銨	1g	常溫
2×尿素-PAGE上樣液	1ml	-20℃
說明書	1份

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸，保存條件見上表，有效期一年。

使用方法：

一、PAGE濃度和交聯(lián)度的選擇指南
尿素-PAGE一般推薦用29：1(丙烯酰胺：甲叉雙丙烯酰胺)的交聯(lián)度，
在此條件下，DNA片段和zuì適PAGE濃度對(duì)應(yīng)關(guān)系如下：

單鏈DNA長度	zuì佳PAGE濃度	二甲苯青FF遷移率 對(duì)應(yīng)的長度	溴酚藍(lán)的遷移率 對(duì)應(yīng)的長度
50-400nt	8%	160nt	45nt
200-1000nt	5%	260nt	65nt
750-2000nt	3.5%	460nt	100nt

二、制備尿素-PAGE膠
1. 配制尿素-PAGE膠(這是配制100mL膠的用量，配制更大體積的膠則需以此用量為基礎(chǔ)按比例增加)
A：新鮮配制10%的APS(過硫酸銨)：按每0.1 克過硫酸銨干粉加1mL超純水的比例將水加到裝有硫酸銨干粉的1.5mL EP 管中，搖晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鮮交聯(lián)度為29:1的40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液(AB溶液，下同)：在裝有77.34 g電泳級(jí)丙烯酰胺干粉的瓶中加入約120mL自備的去離子水，然后將全部甲叉雙丙烯酰胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低，不會(huì)溶解在這少量溶液中)。充分搖晃混勻后所得溶液即40%的AB溶液。配制40%而非30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
C：配尿素-PAGE膠：在一個(gè)250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去離子水、40%AB溶液和10×TBE緩沖液。丙烯酰胺單體溶液具有神經(jīng)毒性，一定要戴手套操作。

PAGE膠濃度	各成分用量(尿素為克，其余單位是mL)			補(bǔ)水到(mL)
	尿素	40%AB溶液	10×TBE緩沖液
5%	42	12.5	5.0	100
6%	42	15.0	5.0	100
7%	42	17.5	5.0	100
8%	42	20.0	5.0	100
9%	42	22.5	5.0	100
10%	42	25.0	5.0	100
11%	42	27.5	5.0	100
12%	42	30.0	5.0	100

D：攪拌溶解，然后用濾紙過濾。zuì好能抽真空10-15分鐘以去除溶液中的氧氣(氧氣能抑制丙烯酰胺聚合反應(yīng))，無條件也可以不脫氧。
E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速搖勻后倒膠。
F:在膠的液面距離達(dá)到頂部時(shí)停止灌膠，插入梳子。
G:室溫聚合30-60分鐘(低溫抑制聚合反應(yīng))。
H: 拔出梳子，用0.5×TEB液沖洗加樣孔。

三、樣品準(zhǔn)備
2. 對(duì)一般樣品、測序樣品、微衛(wèi)星DNA、AFLP樣品、DDRT樣品、RPA樣品：將樣品跟上樣液1:1 混合，95℃ 3分鐘變性，然后放冰上待用。
3. 對(duì)TGGE樣品：可以直接上樣。

四：電泳
4. 將凝膠板固定在電泳裝置上，往上槽和下槽中加入足夠0.5×TEB電泳液。
5.預(yù)電泳5-30分鐘將冰上放置的樣品上樣。
6.連接電源線，打開電源開關(guān)。根據(jù)膠的大小選擇功率(固定功率可以固定產(chǎn)熱，這樣不容易發(fā)生過熱而使膠板破裂的現(xiàn)象。如果固定電流或電壓，產(chǎn)熱都將隨電泳時(shí)間而變化，不好控制)。對(duì)小膠一般用5-6W 固定功率，大膠用15-25W 固定功率。
7. 終止電泳，取出凝膠進(jìn)行后續(xù)的處理(如銀染)。注意：如果銀染，必須延長固定時(shí)間以便讓洗出尿素，否則殘留尿素會(huì)干擾后面的銀染。

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BTN90317 一站式DNA尿素-PAGE電泳套裝 30次
BTN3150 RNA電泳液，10× 250mL
BTN100874 DNA尿素-PAGE上樣液 1.5mL
BTN3690A 紅色DNA上樣液，6× 10mL
BTN70608 miRNA尿素-PAGE上樣液 1.5mL
BTN111108 DNA marker(300-5000bp) 50次
BTN70503A DNA marker(50-500bp) 50次

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名稱：超快核酸電泳液(干粉)
貨號(hào)：BTN51210
規(guī)格：50L
SuperBuffer-2是我司在SuperBuffer基礎(chǔ)上開發(fā)的DNA/RNA 兩用快速電泳液。它跟SuperBuffer一樣，能以高達(dá)30 V/cm的電壓電泳，達(dá)到快速電泳的目的。跟SuperBuffer 不同的是，本產(chǎn)品對(duì)鹽離子濃度敏感度低，同時(shí)還能用于RNA電泳。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.快速，電泳時(shí)間短，對(duì)分辨率要求不高的電泳(如PCR和酶切檢測等)甚至可以在5-10分鐘內(nèi)完成。
2. 不影響后續(xù)的Southern雜交，DNA膠回收和DNA連接等反應(yīng)。
3. 價(jià)格與TBE(干粉)相當(dāng)甚至更。
4. DNA膠回收率高于使用TAE和TBE電泳的膠回收。

儲(chǔ)存條件：常溫保存和運(yùn)輸，有效期兩年。

使用方法：

一：溶液的配制
將本產(chǎn)品全部加到一個(gè)干凈的容量適當(dāng)?shù)娜萜髦?，按下表的用量加入蒸餾水并在室溫下用磁力攪拌器攪拌，直到干粉完全溶解(一般需要30分鐘左右)。
配法一(配制20X濃縮液)：加2.5升得到20×工作液
配法二(直接配制工作液)：加水50升得到50×工作液
注：其他濃度的濃縮液配制可以按比例計(jì)算，但濃縮液濃度不能超過20×，否則干粉不能全部溶解。由于干粉含多種未徹底混合均勻的成份，所以必須一次性全部用于溶液的配制。如果緩沖液(濃縮液或工作液)長時(shí)間不用，zuì好滅菌后放4℃長期保存。

二：DNA電泳
將SuperBuffer-2濃縮液用蒸餾水稀釋到1×，除了需要使用較高電壓才能得到快速的電泳結(jié)果外，操作跟使用TAE和TBE基本一樣。需注意的地方是：
1.電壓：在SuperBuffer-2溶液中既可以使用常規(guī)電壓，也可以使用較高電壓，只是使用常規(guī)電壓時(shí)，其快速的優(yōu)越性就體現(xiàn)不出來。使用較高電壓時(shí)，由于各電泳槽結(jié)構(gòu)不同，zuì佳電壓需要稍做摸索。次zuì好將工作電壓調(diào)到zuì高電壓的80%左右，即平均25 V/cm(電距離)。對(duì)一般minigel，一般可以用250-350V 跑5-10分鐘；對(duì)大的電泳槽，可用400-450V 跑5-10分鐘。每次根據(jù)電泳結(jié)果和緩沖液溫度決定各電泳槽的zuì佳工作電壓和時(shí)間。一般電壓越高，電泳時(shí)間越短。若在電泳時(shí)發(fā)生電流或電壓逐漸下降的現(xiàn)象，請(qǐng)檢查電泳儀是否設(shè)置了電流上限或功率上限。緩沖液電泳次數(shù)超過3次或緩沖液中有細(xì)菌/真菌生長也會(huì)出現(xiàn)此現(xiàn)象，需要更換新的緩沖液。
2.膠濃度：建議將瓊脂糖凝膠的濃度控制在0.8%左右，對(duì)于長度在100bp以下的DNA片段，可以將瓊脂糖凝膠的濃度提高到1.2%左右。由于每次溶膠過程中會(huì)丟失水份，所以zuì好在溶膠后適當(dāng)補(bǔ)充水份(可以前后稱重)，否則膠濃度會(huì)逐漸增加，DNA的移動(dòng)速度會(huì)減低、產(chǎn)熱會(huì)增加。使用0.8%左右的瓊脂糖凝膠的好處是一方面可以節(jié)約膠的用量，另一方面可以使DNA的泳動(dòng)速度更快，同時(shí)還能夠提高DNA的回收率。
3.染色：如果使用EB，zuì好把染料加入到融化后的凝膠中(只是EB的終濃度zuì好為0.4 -0.5μg/mL，比使用TAE和TBE時(shí)稍高)，但也可以加入到電泳緩沖液中或/和電泳上樣液中。如果使用百奧萊博低毒染料綠如藍(lán)，zuì好將染料加入到融化后的凝膠中。如果只有膠中有染料，則長時(shí)間電泳后(超過20分鐘)，大部分染料在高壓下會(huì)與DNA 分離，DNA 條帶可能會(huì)看不見或看起來很淡，此時(shí)應(yīng)該再染色一次。在染色液中加入一定的量的NaCl(終濃度≥0.05 mol/L)能提高染色效果。SuperBuffer-2與SYBR Green I 也有良好的兼容性，可以結(jié)合使用。
4. DNA 條帶扭曲：DNA樣品中所含SDS 量過高時(shí)(SDS 主要來于上樣液)，DNA條帶將出現(xiàn)扭曲，影響實(shí)驗(yàn)效果。建議使用不含SDS的上樣液。
5. 反復(fù)使用：1×SuperBuffer-2電泳液至少可以重復(fù)使用2-3次，如果使用大電泳槽，可以重復(fù)使用的次數(shù)會(huì)更多。
6. TAE和TBE膠：已經(jīng)用TAE和TBE電泳液配置好的瓊脂糖凝膠可以直接放入1× SuperBuffer-2電泳液中按上述電泳條件電泳，但有時(shí)候會(huì)有扭曲現(xiàn)象。

三：RNA電泳
跟DNA電泳一樣，必須在使用前用水將SuperBuffer-2溶液稀釋到1×，其使用方法跟DNA電泳的主要區(qū)別是：
1.電壓：RNA電泳時(shí)，zuì高使用電壓大約只有DNA zuì高使用電壓的一半左右，所以一般minigel可以使用150 V左右的電壓。由于各實(shí)驗(yàn)室電泳槽規(guī)格各異，次電泳時(shí)，zuì好將工作電壓調(diào)到跟MOPS電泳一樣的電壓，每次再逐漸往上調(diào)電壓和時(shí)間，根據(jù)電泳結(jié)果和測定緩沖液的溫度決定今后的工作電壓。
2. RNA上樣液：RNA必須與含變性劑的RNA上樣液混合，并在80℃保溫10分鐘后冰浴2-5分鐘再上樣。不能直接將RNA樣品上樣或使用DNA上樣液，否則電泳不但很難得到清晰的條帶，并且在加樣孔中還會(huì)有看似DNA污染的條帶出現(xiàn)。推薦使用百奧萊博生產(chǎn)的RNA變性/上樣/染色三合一即用型溶液RNAload。
3.膠濃度：RNA電泳zuì好使用1%-1.5%的瓊脂糖凝膠，用1X SuperBuffer-2配制。
4.染色：同DNA電泳。

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