T4 多聚核苷酸激酶（3′磷酸酶由專業(yè)試劑供應商北京百奧萊博提供，用于科學研究，我公司的T4 多聚核苷酸激酶（3′磷酸酶品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括T4 多聚核苷酸激酶（3′磷酸酶活性缺失）在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：T4 多聚核苷酸激酶（3′磷酸酶活性缺失）
英文名稱：T4 polynucleotide kinase (3 phosphatase deficiency)
產(chǎn)品貨號：SV1045
產(chǎn)品規(guī)格：1KU|200U

特性:
DNA 或 RNA 5′ 末端的磷酸化，以便進行連接反應。
DNA 或 RNA 的末端標記，用作探針和進行 DNA 測序
用 T4 多聚核苷酸激酶（M0201）除去 3′ 磷酸基團
T4 多聚核苷酸激酶（缺失 3′ 磷酸酶活性）（M0236）將 3′ 端已經(jīng)磷酸化的單核苷酸 5′ 磷酸化，制備pNp 底物，用于添加到 DNA 或 RNA的 3′ 端
用 T4 多聚核苷酸激酶（缺失 3′ 磷酸酶活性）（M0236）對 3′ 端有磷酸基團的寡核苷酸的 5′ 端進行標記
概述:
T4 多聚核苷酸激酶能夠催化 ATP 的 γ-位磷酸基團轉(zhuǎn)移到寡核苷酸鏈（雙鏈或單鏈 DNA 或 RNA）的 5′ -羥基末端以及 3′ -單磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶（M0201）還具有 3′ 磷酸酶活性，將 3′ -磷酸基團從寡核苷酸的 3′ 磷酸末端、脫氧 3′ -單磷酸核苷和脫氧 3′ -二磷酸核苷上水解掉。經(jīng)修飾后的酶（M0236）具有所有激酶的活性，但是缺失了 3′ 磷酸酶活性。
來源:
重組 E. coli 菌株，克隆有 T4 多聚核苷酸激酶或修飾的 T4 多聚核苷酸激酶基因。
反應條件:
1X T4 多聚核苷酸激酶反應緩沖液
[70 mM Tris-HCl（pH 7.6 @ 25℃），10 mM MgCl2，5 mM DTT]，37℃ 溫育。
熱失活:65℃ 加熱 20 分鐘。
注意事項:
達到zuì佳酶活力，需要新鮮緩沖液（在舊緩沖液中，由于氧化造成的 DTT 含量減少會降低酶活力）。
放射性標記反應:
50 μl 反應體系中，用 1X T4 多聚核苷酸激酶反應緩沖液、50 pmol 的 γ-[32P] ATP 和 20 單位的酶 37℃ 溫育 30 分鐘可催化 1-50 pmol 的 5′ 末端磷酸化。[33P] ATP 可代替 [32P] ATP 作標記反應。
CTP、GTP、TTP、UTP、dATP 及 dTTP 均可替代 ATP 作為磷酸供體。
DNA 或 RNA 磷酸化反應（放射性和非放射性）操作流程請聯(lián)系我們咨詢。
要提高平齊末端或 5′ 凹陷末端的磷酸化效率，可在加入 T4 多聚核苷酸激酶前，先將 DNA 溶液于 70℃ 加熱 5 分鐘，然后冰上冷卻，并加入 5%（W/V）的 PEG-8,000。
T4 多聚核苷酸激酶需要 ATP 才能發(fā)揮活性，但是為了適用于高活力的放射性標記反應:，在隨酶提供的反應緩沖液中不含 ATP。
一般來說，進行激酶反應之后是連接反應。在這種情況下，T4 多聚核苷酸激酶反應在連接酶反應緩沖液中 37℃ 溫育 30 分鐘即可。反應后的產(chǎn)物可直接進行連接，無需改變緩沖液和進行熱失活。如果連接時需要保持其它 DNA 片段的去磷酸化狀態(tài)，則需要在連接反應前熱失活 T4 多聚核苷酸激酶。
質(zhì)保聲明:
T4 多聚核苷酸激酶和 T4 多聚核苷酸激酶（3′ 磷酸酶活性缺失）經(jīng)過嚴格的質(zhì)控檢測，確保該產(chǎn)品具有zuì高的活性和純度。
單位定義:
1 單位即 1 個 Richardson 單位，指 37℃條件下，30 分鐘內(nèi)催化 1 nmol 酸不溶性 [32P] 摻入所需要的酶量（1）。
濃度:
10,000 units/ml。

根據(jù)您的關(guān)注的T4 多聚核苷酸激酶（3′磷酸酶活性缺失），您可能還對以下產(chǎn)品有需求：



名稱：人類cDNA
貨號：WE0227
規(guī)格：100μl(20次反應)
  本產(chǎn)品是以人胎盤組織RNA為模板，Oligo(dT)以及Random為引物, 用百奧萊博的高靈敏度的逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄得到的PCR即用型cDNA，可用于PCR實驗的陽性對照。純度：OD260/280≈1.8

使用方法：
以下舉例為常規(guī)PCR反應體系和反應條件，實際操作中應根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進行相應的改進和優(yōu)化。

1、PCR反應體系：

試劑	50μl體系	終濃度
10×Taq PCR Buffer with Mg2+	5μl	1×
dNTP Mix，2.5 mM each	4μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Human Placenta cDNA	5μl
Taq DNA Polymerase，2.5 U/μl	0.5μl
RNase-Free Water	補水至50μl

注意：
1)引物濃度請以終濃度0.1-1.0μM作為設(shè)定范圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應體系。
2)鎂離子濃度請以終濃度1.5-3 mM作為設(shè)定范圍的參考。本產(chǎn)品的10×PCR Buffer中已經(jīng)含有15 mM鎂離子，可根據(jù)丌同的引物對和模板來調(diào)節(jié)鎂離子濃度，由此優(yōu)化反應體系。

2、將混合好的液體進行PCR反應。
3、結(jié)果檢測：反應結(jié)束后取5μl反應產(chǎn)物，加入適量上樣緩沖液后進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

儲存條件：-20℃，避免反復凍融

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貨號	名稱	規(guī)格
SV0977	oneTaq RT-PCR 試劑盒	30次
SV0996	ThermoPol 反應緩沖液套裝	6ml
SV1166	T4 噬菌體基因 32 編碼蛋白	500μg|100μg
SV1168	Tth RecA 蛋白	100μg
SV1178	Lambda DNA （不含 N6-甲基腺嘌呤）	1250μg|250μg
SV1184	pUC19 載體	250μg|50μg

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