WE0252 DH5α感受態(tài)細胞

產品簡介
DH5α感受態(tài)細胞是高品質的克隆與表達產品,由北京百奧萊博供應,本產品僅用于生物化學研究方面,DH5α感受態(tài)細胞是我司眾多優(yōu)質克隆與表達之一,質量堪比同類進口產品,價格非常優(yōu)惠,目前正熱烈促銷中,恭候您的咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示:包括DH5α感受態(tài)細胞在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產品名稱:DH5α感受態(tài)細胞
英文名稱:DH5α Competent Cell
產品貨號:WE0252
產品規(guī)格:100μl×10支
本產品是采用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞,可用于DNA熱擊轉化。DH5α是一種常用于質??寺〉木辏洇?0lacZΔM15基因產物可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α互補,可用于藍白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質粒DNA的提取。使用pUC19質粒檢測,轉化效率可達108,適用于的質粒DNA克隆并能保證高拷貝質粒的穩(wěn)定復制。
產品組成:
| 組份 | 0.1ml×10支 |
| DH5α Competent Cell | 10×100μl |
|
Co | 10μl |
實驗前準備及重要注意事項
1、感受態(tài)細胞一定要用干冰運輸。感受態(tài)細胞應在-80℃下保存,不可反復凍融和放置時間過長,以免降低感受態(tài)細胞的轉化效率。
2、轉化所有步驟均在無菌條件下操作。
3、包裝中有0.1ng/μl的pUC19DNA,供對照試驗使用。
使用方法:
1、取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100μl,可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2、待感受態(tài)細胞融化后,向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量的DNA,通常100μl感受態(tài)細胞能夠被1ng超螺旋質粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
3、42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘。
4、向每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150 rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇。
5、根據(jù)實驗需求,取適量已轉化的感受態(tài)細胞,加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,
倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16小時。
注意:
1)涂布用量可根據(jù)具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多,可取少量轉化產物涂布平板;若轉化的DNA總量較少,可取200-300μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆數(shù)較少,可通過離心(4000rpm,2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2)新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉化菌落數(shù)過少,可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
儲存條件:-80℃。
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