Protein A/G免疫沉淀磁的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的免疫檢測產(chǎn)品，本制品用于科學(xué)研究，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價位合理，需要Protein A/G免疫沉淀磁等免疫檢測產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括Protein A/G免疫沉淀磁珠試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：Protein A/G免疫沉淀磁珠試劑盒
英文名稱：Protein A/G Immunoprecipitation Kit
產(chǎn)品貨號：CZ020
產(chǎn)品規(guī)格：20次/100次

產(chǎn)品簡介：
Protein A/G Matrix免疫沉淀磁珠及試劑盒系列產(chǎn)品是利用百奧萊博納米表面技術(shù)使Protein A/G高密度定向包被到超順磁性微球表面，與當(dāng)前免疫磁珠市場上同類產(chǎn)品相比，該產(chǎn)品具有更多的抗體結(jié)合位點(diǎn)，磁珠使用量更少，非特異性結(jié)合率低，可便捷地進(jìn)行免疫沉淀實(shí)驗(yàn)。每毫升免疫沉淀磁珠結(jié)合Human IgG的能力可達(dá)到300 μg以上，單個沉淀反應(yīng)僅需25 μL磁珠即可完成檢測。微米級磁珠提供的比表面積，大幅縮短抗體與抗原吸附所需的平衡時間，15 min內(nèi)即可完成抗體吸附過程，30 min內(nèi)完成抗原沉淀操作。簡短的操作時間避免長時間操作造成目標(biāo)蛋白水解，保證了目標(biāo)蛋白的活性及蛋白復(fù)合物的完整性。
免疫沉淀磁珠試劑盒配有經(jīng)過優(yōu)化預(yù)制的緩沖液，為免疫沉淀實(shí)驗(yàn)提供了zuì佳的反應(yīng)條件，增強(qiáng)了免疫沉淀實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性。
本產(chǎn)品可廣泛應(yīng)用于細(xì)胞裂解物、細(xì)胞分泌上清、血清、腹水等樣品中抗原的免疫沉淀反應(yīng)。操作者可以參考本操作說明書，附表1的數(shù)據(jù)了解不同種屬來源及亞型的抗體與Protein A磁珠、Protein A/G的結(jié)合能力。
儲存條件：2～8℃保存
保存期：1年
注：磁珠結(jié)合Human IgG能力(Antibody Capacity)分別為：Protein A：0.4～0.5 mg/mL; Protein A/G：0.5～0.6 mg/mL
操作流程：
1. 抗原樣品制備：本操作說明書提供以下四種樣品處理方法，建議您根據(jù)不同來源的抗原樣品選擇適當(dāng)?shù)姆绞竭M(jìn)行預(yù)處理，使待檢測抗原釋放至樣品溶液中。
血清樣品處理：若目標(biāo)蛋白豐度較高，建議用結(jié)合緩沖液(②)稀釋血清樣品至目標(biāo)蛋白終濃度為10～100 μg/mL，置于冰上備用(或置于-20℃長期保存)。
懸浮細(xì)胞樣品處理：離心收集細(xì)胞(4℃，500 g，10 min)，棄上清后稱重，按每毫克細(xì)胞50 μL的比例用1× PBS(③)洗滌2次；按每毫克細(xì)胞5～10 μL 的比例加入結(jié)合緩沖液(②)，同時加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM 的PMSF)，混勻后置于冰上處理10 min；離心收集上清液(4℃,14000 g,10 min)，置于冰上備用(或置于-20℃長期保存)。
貼壁細(xì)胞樣品處理：移去培養(yǎng)基，按每1.0×105個細(xì)胞150 μL的比例用1×PBS(③)洗滌兩次；用細(xì)胞刮棒刮脫細(xì)胞，收集至1.5 mL EP管內(nèi)，按每1.0×105個細(xì)胞20～30 μL 的比例加入結(jié)合緩沖液(②)，同時加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM的PMSF)，混勻后置于冰上處理10 min；離心收集上清液(4℃，14000 g，10 min)，置于冰上備用(或置于-20℃長期保存)。
大腸桿菌樣品處理：離心收集大腸桿菌(4℃，12000 g，2 min)，棄上清后稱重，按每克(濕重)菌體 10 mL的比例用1×PBS(③)洗滌2次；按每克(濕重)菌體5～10 mL的比例加入結(jié)合緩沖液(②)，同時加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM 的PMSF)，重懸菌體，超聲裂解細(xì)胞，離心收集上清(4℃，17000 g，10 min)。
2. 磁珠預(yù)處理：將免疫沉淀磁珠(①)漩渦振蕩1 min，使磁珠充分振蕩重懸；取25～50 μL磁珠懸液置 于1.5 mL EP管中。加入200 μL 結(jié)合緩沖液(②)洗滌，進(jìn)行磁性分離［將EP管放置于磁性分離器(⑦)上，使磁珠被吸附在管壁至溶液澄清；該操作描述以下省略］，棄上清液，從磁性分離器上取下EP管，重復(fù)洗滌一次。zuì后加入200 μL 結(jié)合緩沖液(②)重懸磁珠以備用。
3. 抗體結(jié)合反應(yīng)：
抗體工作液的制備：用結(jié)合緩沖液(②)稀釋抗體樣品，配制成終濃度為5～50 μg/mL抗體工作液，置于冰上備用。
抗體吸附：將步驟2預(yù)處理的磁珠懸液進(jìn)行磁性分離，棄上清液；加入200 μL抗體工作液，迅速重懸后在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)EP管，15 min后進(jìn)行磁性分離，收集上清液置于冰上以備后續(xù)檢測。
洗滌：向EP管中加入200 μL 結(jié)合緩沖液(②)洗滌，用移液器輕輕吹打使磁珠-抗體復(fù)合物均勻分散，然后進(jìn)行磁性分離，棄上清液，從磁性分離器上取下EP管。重復(fù)以上洗滌操作一次。
4. 抗體交聯(lián)反應(yīng) (備選)：如操作者需要將抗體和目標(biāo)抗原復(fù)合物共同洗脫，請忽略本步驟，進(jìn)行步驟5。
本步驟適用于操作者需要單獨(dú)洗脫目標(biāo)抗原的試驗(yàn)，推薦使用BS3(Thermo Scientific，Cat. #21580)作為交聯(lián)劑，相關(guān)實(shí)驗(yàn)請參照該試劑的操作說明。
5. 抗原沉淀反應(yīng)
抗原吸附：加入200 μL步驟1中制備的抗原樣品，用移液器輕輕吹打使抗原與磁珠-抗體復(fù)合物均勻分散。在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)EP管10 min，使抗原與抗體充分結(jié)合，如結(jié)合力較弱則可在室溫下反應(yīng)1 h或者在4℃下反應(yīng)過夜。
洗滌與轉(zhuǎn)移：將上述完成抗原吸附的磁珠-抗體-抗原復(fù)合物進(jìn)行磁性分離，收集上清液置于冰上以備后續(xù)檢測。向EP管中加入200 μL洗滌緩沖液(④)洗滌，用移液器輕輕吹打使磁珠-抗體-抗原復(fù)合物均勻分散，然后進(jìn)行磁性分離，棄上清液；從磁性分離器上取下EP管，再重復(fù)洗滌兩次。zuì后加入200 μL 洗滌緩沖液(④)，用移液器將磁珠-抗體-抗原復(fù)合物懸液轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL EP管中*，并執(zhí)行磁性分離，移棄上清。
(*注：抗原洗脫前務(wù)必將磁珠轉(zhuǎn)移到新的EP管，避免將管壁上原有的非特異性吸附蛋白一起洗脫。)
6. 抗原洗脫：本操作說明書提供以下兩種抗原洗脫方案，操作者可根據(jù)后期檢測的需要選擇不同的抗原洗脫方法。
變性洗脫法：此法洗脫的樣品適用于SDS-PAGE檢測。從磁性分離器上取下EP管，向其中加入25 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer(自備)混合均勻，95℃加熱5 min。然后執(zhí)行磁性分離［也可以使用離心的方式(室溫下13000 g，10 min)］收集上清液進(jìn)行SDS-PAGE檢測。
非變性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。從磁性分離器上取下EP管，向其中加入20 μL洗脫緩沖液(⑤)混合均勻，室溫孵育10 min。然后執(zhí)行磁性分離［也可以使用離心的方式(4℃，13000 g,10 min)］，收集上清液至新的EP管，并立即加入1.0 μL中和緩沖液(⑥)將洗脫產(chǎn)物pH調(diào)節(jié)至中性，用于后期功能分析。
注意事項(xiàng)：
1. 進(jìn)行免疫沉淀操作之前，請務(wù)必認(rèn)真閱讀本操作說明書。
2. 本產(chǎn)品須與磁性分離器配套使用。
3. 磁珠使用前應(yīng)充分振蕩均勻。
4. 磁珠應(yīng)保存在儲存溶液中，防止干燥。
5. 請勿將磁珠冷凍或離心，以免引起不可逆聚集。
6. 10×PBS(③)應(yīng)在無菌條件下稀釋，一旦發(fā)現(xiàn)溶液有污染情況，請停止使用該溶液。
7. 為保證zuì佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請選擇特異性較強(qiáng)的抗體進(jìn)行免疫沉淀反應(yīng)。
8. 操作者可根據(jù)實(shí)際需求，利用抗體結(jié)合反應(yīng)步驟以及抗原結(jié)合反應(yīng)步驟中收集的上清液檢測抗體、抗原 和磁珠的結(jié)合情況。
9. 對于IP實(shí)驗(yàn)，不同類型的抗體與抗原結(jié)合的親和性是有區(qū)別的，抗體與抗原結(jié)合還會受到結(jié)合緩沖液和洗滌緩沖液的影響，因此，如果操作者使用本試劑盒提供的緩沖體系不能獲得很好的實(shí)驗(yàn)結(jié) 果，可自行篩選及配制緩沖液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
10. 本磁珠表面包被的重組蛋白Protein A/G在端條件下(如低pH、加熱處理)存在低的蛋白脫落情 況，但仍然不建議操作者用于分子量約130 kD目標(biāo)蛋白的免疫沉淀實(shí)驗(yàn)。
11. 本產(chǎn)品僅供研究使用。
常見問題及解答(FAQ):
Q1：如何提高抗體與磁珠結(jié)合效率?
A1：磁珠與抗體的結(jié)合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關(guān)，請確認(rèn)抗體的類型與Protein A/G 配基的親和效率(附表1)。如抗體所屬亞型與Protein A/G 的親和度較低，可以通過增加抗體與磁珠的孵育時間(30～120 min)、提高結(jié)合緩沖液的pH值(8～9)及降低離子強(qiáng)度(25～100 mM NaCl)等方法提高親和效率。
Q2：如何提高磁珠在免疫沉淀反應(yīng)中的特異性?
A2：可以先將抗體與樣品進(jìn)行孵育，形成抗體-抗原復(fù)合物，再用Protein A/G 磁珠捕獲復(fù)合物。這種方法可以提高抗體與抗原的結(jié)合效率，并降低磁珠與樣品接觸的時間，從而提高沉淀產(chǎn)物的特異性。對于蛋白質(zhì)/核酸共沉淀或染色質(zhì)免疫共沉淀也推薦使用此法。
Q3：如何避免磁珠在儲存或使用過程中可能出現(xiàn)的聚集情況？
A3：磁珠應(yīng)保存在2～8℃，使用時應(yīng)避免由于污染而導(dǎo)致的不可逆聚集，或因干燥而導(dǎo)致的聚集。磁珠在低 pH的洗脫緩沖液中發(fā)生聚集屬于正?，F(xiàn)象 ，不影響磁珠的正常使用。在Binding buffer和 Elution buffer中添加終濃度為0.1%(v/v)的非離子型去垢劑(如NP-40、Tween-20或Triton X-100)可有效防止磁 珠聚集。經(jīng)過低pH洗脫操作的磁珠可以用結(jié)合緩沖液洗滌至中性，然后用含有0.1% (v/v)Tween-20的 Tris buffer(pH7.5)振蕩重懸磁珠，并用超聲波水浴處理2 min，即可使磁珠恢復(fù)均勻狀態(tài)，以上處理均不影響磁珠的抗體結(jié)合效率。
Q4：如何解決磁珠易粘附管壁的現(xiàn)象？
A4：建議使用低吸附率的耗材進(jìn)行磁珠操作。另外，在緩沖液中添加0.01%～0.1%(v/v)的非離子型去垢劑(如NP-40、Tween-20或Triton X-100)可以有效降低磁珠對耗材的粘附)。
Q5: 磁珠在使用過程中出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象？
A5：磁珠在使用時如果出現(xiàn)結(jié)塊現(xiàn)象一般較難振蕩打散，容易導(dǎo)致分布不均，出現(xiàn)該問題的原因是磁珠在磁場中放置太久而使磁珠牢固的結(jié)合在一起。用超聲波水浴處理2 min即可打散磁珠使其重新分散，但應(yīng)注意超聲處理也會使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落，所以磁珠在加樣后洗脫前不宜使用該方法。

根據(jù)您的關(guān)注的Protein A/G免疫沉淀磁珠試劑盒，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：

貨號	名稱	規(guī)格
YT095	甘油明膠封片液(Kaiser封片液)	10ml
ZN1894	蛋白質(zhì)銀染檢測試劑	40次
ZN1909	BSA TBS緩沖系統(tǒng)封閉液(干粉)	1包
ZN1935	Western Blotting DAB顯色法檢測試劑盒(黃色)(小鼠IgG)	1盒
BTN91101A	一管式TMB顯色液(可溶型)	100mL
GL0584	多聚甲醛-Tween20溶液(1%/0.05%)	500ml
GL1050	PBST(10×,pH7.4)	500ml

關(guān)注Protein A/G免疫沉淀磁珠試劑盒，的同時，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：



名稱：免疫染色固定液
貨號：YT086
規(guī)格：100ml
本品可以用于免疫染色時細(xì)胞樣品或組織切片的固定。按照每個樣品固定時需要1毫升固定液計算，一個包裝的免疫染色固定液可以固定100個樣品。

儲存條件：4℃，有效期一年。

名稱：抗熒光淬滅封片液
貨號：YT097
規(guī)格：5ml
本品是一種用于減緩熒光淬滅的封片試劑?？梢杂糜跍p緩各種常見熒光染料的熒光淬滅。操作簡單，在封片時用移液器滴一滴抗熒光淬滅封片液在樣品上，蓋上蓋玻片即可完成操作。按照每個樣品封片需要50微升計算，足夠用于100個樣品的封片。

注意事項(xiàng)：
1. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，染色后的樣品宜避光保存。可以向百奧萊博選購各種型號的載玻片存儲盒。
2. 在使用抗淬滅封片液的情況下可以減緩淬滅，但仍宜盡量避光。

儲存條件：-20℃，有效期一年。

名稱：Cy3抗兔免疫熒光染色試劑盒
貨號：YT107
規(guī)格：>300次
本試劑盒含有Cy3標(biāo)記的山羊抗兔IgG(H+L)抗體，可以用于檢測兔來源的相應(yīng)一抗，觀察到的顏色為非常鮮艷的紅色。Cy3是近年新開發(fā)的一種紅色熒光探針。它比大部分其它的紅色熒光探針更加明亮，更加不容易淬滅，而且背景更低。Cy3的吸收峰550nm、發(fā)射峰570nm。本試劑盒提供了含有熒光標(biāo)記抗體穩(wěn)定劑的免疫熒光染色二抗稀釋液，可以確保熒光標(biāo)記抗體稀釋后在4℃可以保存長達(dá)6個月，并且在6個月內(nèi)至少可以重復(fù)使用10次。本試劑盒含有抗熒光淬滅封片液，可以使熒光更加持久。本試劑盒對于六孔板內(nèi)的細(xì)胞樣品或常規(guī)切片，至少可以檢測300個樣品。

試劑盒組份：
抗兔Cy3————————————30μl
免疫熒光染色二抗稀釋液—————50ml
抗熒光淬滅封片液————————15ml

注意事項(xiàng)：
1. 需熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡。
2. 在使用抗熒光淬滅封片液的情況下可以減緩淬滅，但仍宜盡量避光，特別是需要盡量縮短在熒光顯微鏡下的觀察時間。
3. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，染色后宜盡快進(jìn)行熒光顯微鏡下的觀察。如果不能及時觀察可以4℃避光保存，但存放時間通常不宜超過一周，隨著存放時間的延長可能會導(dǎo)致觀察效果越來越差。
4. 免疫熒光染色效果的好壞和一抗的關(guān)系非常密切。建議選購有較多文獻(xiàn)報道的并注明可以用于免疫熒光染色的一抗用于本實(shí)驗(yàn)。
5. 如果觀察時發(fā)現(xiàn)熒光過弱，可以適當(dāng)提高一抗的濃度；如果熒光還是比較弱，可以適當(dāng)提高熒光標(biāo)記抗體的濃度。

儲存條件：-20℃，有效期一年。


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