北京百奧萊博供應(yīng)的2×Long Taq PCR M用于科研目的，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)位合理，需要2×Long Taq PCR M等核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品的客戶(hù)，請(qǐng)到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括2×Long Taq PCR MasterMix在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：2×Long Taq PCR MasterMix
產(chǎn)品貨號(hào)：RFT092
產(chǎn)品規(guī)格：500μl|5×500μl

本品包含Long Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)的增強(qiáng)劑和優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑，濃度為2×。使用時(shí)，只需補(bǔ)加實(shí)驗(yàn)所需的引物和模板后即可進(jìn)行PCR反應(yīng)，可zuì大限度的減少人為誤差，具有快速簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。用于短鏈和長(zhǎng)鏈DNA擴(kuò)增，特別適合于長(zhǎng)片段DNA的擴(kuò)增。使用該產(chǎn)品得到的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物末端含有一個(gè)A堿基，可以直接用于TA克隆。

質(zhì)量控制：經(jīng)檢測(cè)無(wú)外源核酸酶活性；PCR方法檢測(cè)無(wú)宿主殘余基因組DNA；能有效地?cái)U(kuò)增人基因組中的單拷貝基因。

使用方法;
1、冰浴中徹底融化2×MasterMix，混勻后Minispin將溶液收集到管底。
2、按照下表在0.2ml PCR管中制備反應(yīng)體系:

	50μl反應(yīng)體系	終濃度
2×MasterMix	25μl	1×
上游引物 10μM	1-5μl	0.2-0.8μM
下游引物 10μM	1-5μl	0.2-0.8μM
模板	×μl	10pg-1μg
水	補(bǔ)至50μl

3、快甩離心將反應(yīng)液收集到管底。
4、PCR儀如果沒(méi)有熱蓋加熱的話，補(bǔ)加25μl礦物油。
5、PCR儀上執(zhí)行以下程序：

三步法：

步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
初始變性	94℃	1-5 min	1
變性	94℃	30 sec	25-40*
退火	Tm-5℃*	30 sec
延伸	72℃	1 min/kb
zuì后延伸	72℃	5 min	1

兩步法：

步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
初始變性	94℃	1-5 min	1
變性	94℃	30 sec	25-40*
退火和延伸	68℃	1 min/kb
zuì后延伸	72℃	5 min	1

注： PCR 反應(yīng)條件視模板、引物等的結(jié)構(gòu)條件不同而各異。在實(shí)際操作中需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物的長(zhǎng)短等具體情況，設(shè)定zuì佳的反應(yīng)條件(溫度、時(shí)間等)。

儲(chǔ)存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融。

根據(jù)您的關(guān)注的2×Long Taq PCR MasterMix，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：



名稱(chēng)：2×Taq MasterMix(含染料)
貨號(hào)：WE0102
規(guī)格：1ml|5ml|25ml
  Taq MasterMix是由Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑組成的預(yù)混體系，濃度為2×。預(yù)配好的PCR混合液可根據(jù)使用量的多少調(diào)節(jié)擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性和得率，使操作更加簡(jiǎn)單快捷，并可zuì大限度地減少人為誤差和污染。的MasterMix配方使擴(kuò)增產(chǎn)物得率高，重復(fù)性強(qiáng)，穩(wěn)定性好。本產(chǎn)品已加入染料(藍(lán)色)，反應(yīng)結(jié)束后可直接進(jìn)行電泳檢測(cè)，無(wú)需再使用上樣緩沖液。擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物3"端附有一個(gè)“A”堿基，因此可直接用于T/A克隆。主要適用于PCR法擴(kuò)增DNA、DNA序列測(cè)定等實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品組成：

組份	1ml	5ml	25ml
2×Taq MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml	5×5ml
ddH2O	1ml	5×1ml	5×5ml

注意：2×Taq MasterMix含有Taq DNA Polymerase, 3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。

質(zhì)量控制：
1、經(jīng)檢驗(yàn)無(wú)外源核酸酶活性；
2、PCR方法檢測(cè)無(wú)宿主殘余DNA；
3、能有效地?cái)U(kuò)增多種基因組中的單拷貝基因。

使用方法：
以下舉例為以人基因組DNA為模板，擴(kuò)增1 kb的片段的PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化。

1、PCR反應(yīng)體系：

試劑	50μl反應(yīng)體系	終濃度
2×Taq MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物濃度請(qǐng)以終濃度0.1-1.0μM作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

2、PCR反應(yīng)條件：

步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94℃	2 min
變性	94℃	30 s	25-35 個(gè)循環(huán)
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
終延伸	72℃	2 min

注意：
1)一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度Tm低5℃，無(wú)法得到理想的擴(kuò)增效率時(shí)，適當(dāng)降低退火溫度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，提高退火溫度，由此優(yōu)化反應(yīng)條件。
2)延伸時(shí)間應(yīng)根據(jù)所擴(kuò)增片段大小設(shè)定，本產(chǎn)品Taq DNA Polymerase的擴(kuò)增效率為2 kb/min。
3)可根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，錯(cuò)配機(jī)率會(huì)增加，非特異性背景嚴(yán)重。所以在保證產(chǎn)物得率的前提下應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)。


儲(chǔ)存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融。

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