2×PCR Mastermix由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于生化實驗研究等領(lǐng)域，我公司專注于核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的2×PCR Mastermix質(zhì)量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括2×PCR Mastermix(SYBR Green)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：2×PCR Mastermix(SYBR Green)
產(chǎn)品貨號：QN2077
產(chǎn)品規(guī)格：50T(1.25ml)|200T(5ml)



根據(jù)您的關(guān)注的2×PCR Mastermix(SYBR Green)，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：

貨號	名稱	規(guī)格
BTN90302	25mM氯化鎂溶液(PCR級MgCl2溶液)	5mL
BTN130985	免DNA提取PCR試劑盒(細(xì)胞組織裂解物直接PCR試劑盒)	100次
WE0131	cDNA鏈合成試劑盒	100次
WE0137	一步法Real-Time RT-qPCR試劑盒	100次
WE0141	快速實時熒光定量PCR預(yù)混體系	5ml
WE0148	一步法逆轉(zhuǎn)錄實時熒光定量PCR試劑盒	100次

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名稱：miRNA cDNA鏈合成試劑盒
貨號：BTN130911
規(guī)格：25次
本試劑盒采用在miRNA 3′末端加多聚A 尾的方法來使miRNA 具有Poly(A)尾，之后再使用Oligo(dT)-Tag引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，zuì終合成miRNA 對應(yīng)的鏈cDNA。其反應(yīng)流程如下：


產(chǎn)品特點：
1. 兩步式操作，行Poly(A)加尾，再進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
2. 只需要1μg的total RNA。
3. 所得cDNA可用于檢測多種miRNA，不僅減少了誤差、節(jié)約了樣品，同時還實現(xiàn)了檢測的高通量。
4.與miRNA熒光定量PCR 檢測試劑盒兼容。
5.特異性好，獨特的miRNA引物及反應(yīng)體系避免了Pre-miRNA的非特異擴(kuò)增。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
E.coli Poly(A)聚合酶(5U/μL)	10μl
10×Poly(A)聚合酶反應(yīng)液	50μl
ATP溶液，1mM	50μl
Oligo(dT)-Tag引物(0.5ug/μL)	25μl
MMLV 逆轉(zhuǎn)錄(含RI)	50μl
4×RT Buffer(含dNTP)	125μl
RNase-free 水	1ml

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存。

使用方法：

一、對miRNA 3′末端進(jìn)行加Poly(A)處理
1.在冰上預(yù)冷RNase-Free的反應(yīng)管內(nèi)加入以下試劑至總體積20μL。注意需要zuì后加入E.coli Poly(A)聚合酶。

試劑組份	體積
自備的Total RNA(見注)	1μg
10× Poly(A)聚合酶反應(yīng)液	2μl
ATP溶液，1mM	2μl
RNase-Free水	補水至20μL
E.coli Poly(A)聚合酶(5U/μL)	0.4μL(2U)

注：在反應(yīng)中使用的Total RNA必須含有miRNA。也可以直接使用miRNA(建議加入量為2–5μL，需根據(jù)目的miRNA的豐度決定)。
2. 移液器輕輕混勻上述配制的反應(yīng)液，短暫離心后在37℃反應(yīng)60 min。所得的反應(yīng)液可以直接進(jìn)行下游實驗(注意：只能把2μL 直接用于后續(xù)的RT反應(yīng)，多于2μL 則需要先乙醇-乙酸鈉沉淀，再將加尾后的miRNA 溶于水，然后再取所需量用于RT。如果不經(jīng)過沉淀，帶入的殘留的poly(A)聚合酶反應(yīng)液將會干擾RT反應(yīng))，也可以放置-20℃短暫保存。如需長期保存建議存放于-80℃。

二、對帶Poly(A)尾巴的miRNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
3. 按照下表設(shè)置20μL體系的RT反應(yīng)：

成分	體積
Poly(A)反應(yīng)產(chǎn)物(來于上步)	2μl
RNase-Free水	10μl
Oligo(dT)-Tag引物	1μl
4×RT Buffer(含dNTP)	5μl
MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含RI)	2μl

4. 移液器輕輕混勻上述配制的反應(yīng)液，短暫離心后在42℃反應(yīng)60 min。
5. 70℃保溫10 min 終止反應(yīng)。
6. 合成的cDNA反應(yīng)液可放置于-20℃保存；也可以暫時冰上放置，立即用于后續(xù)的熒光PCR 定量檢測，不需要純化。

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