JN0060 PCR通用引物

產(chǎn)品簡介
我公司致力于為客戶提供高純度、低成本的活性重組蛋白,包括PCR通用引物在內(nèi)的各類受體、細(xì)胞因子、生長因子、轉(zhuǎn)錄因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示:包括PCR通用引物在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:PCR通用引物
英文名稱:PCR Universal Primer
產(chǎn)品貨號:JN0060
產(chǎn)品規(guī)格:0.5ml×5
百奧萊博提供高質(zhì)量的常見通用引物,其各自的濃度為10μM。這些通用引物可 立即使用于PCR反應(yīng)及測序反應(yīng)。對于標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系,建議在50μl PCR反應(yīng)體系中使用1μl引物(10μM)。
產(chǎn)品特點(diǎn):
可靠性:每批都經(jīng)過PCR擴(kuò)增檢測,確??色@得滿意的擴(kuò)增結(jié)果;
方便:50μl PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入1μM即可。
引物名稱及序列:
| 目錄號 | 引物名稱 | 序列 |
| JN0060-01 | T3 | ATTAACCCTCACTAAAG |
| JN0060-02 | T7 | AATACGACTCACTATAG |
| JN0060-03 | T7 ter | GCTAGTTATTGCTCAGCGG |
| JN0060-04 | SP6 | ATTTAGGTGACACTATAG |
| JN0060-05 | M13F | GTAAAACGACGGCCAGT |
| JN0060-06 | M13R | AACAGCTATGACCATG |
| JN0060-07 | CMV forward | CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| JN0060-08 | BGH reverse | TAGAAGGCACAGTCGAGG |
| JN0060-09 | EGFP-C | CATGGTCCTGCTGGAGTTCGTG |
| JN0060-10 | EGFP-N reverse | CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG |
| JN0060-11 | SV40 Pro forward | TATTTATGCAGAGGCCGAGG |
| JN0060-12 | SV40 pA reverse | GAAATTTGTGATGCTATTGC |
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名稱:Pfu DNA聚合酶(Pfu酶)(含buffer)
貨號:YT372
規(guī)格:200U|1000U
pfu DNA 聚合酶簡稱Pfu酶,是zuì常用的高保真DNA聚合酶之一。Pfu DNA Polymerase是一種來源于嗜熱菌Pyrococcus furiosus的高度熱穩(wěn)定的DNA聚合酶。Pfu酶的分子量為90kDa。Pfu酶可以催化5’至3’方向的依賴于DNA模板的脫氧核苷酸的聚合。和Taq酶不同,Pfu酶有3’至5’的外切酶活性(proofreading activity)。另外,Pfu酶有5’至3’外切酶活性,但Pfu酶沒有反轉(zhuǎn)錄酶活性。
由于Pfu酶有3’至5’的外切酶活性,因此在PCR擴(kuò)增過程中出錯(cuò)的幾率大大降低,出錯(cuò)率為2.6×10e-6。Pfu的出錯(cuò)率不僅遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于Taq酶,也低于一些其它的高保真DNA聚合酶例如Vent、DeepVent、Pwo、Tli等,因此Pfu酶常作為選的高的高保真DNA聚合酶。
來源:本Pfu DNA Polymerase為recombinant Pfu DNA Polymerase,通過大腸桿菌表達(dá)純化獲得,和純化獲得的天然Pfu DNA Polymerase在各方面的性質(zhì)相同。
用途:高保真PCR (high fidelity PCR)、點(diǎn)突變、雙平端PCR克隆等。
1)Pfu酶擴(kuò)增出來的DNA片斷為雙平端,可以用于雙平端克隆,但不能用于常規(guī)的T載體克隆。
2)dUTP和dITP或含有dUTP和dITP的引物不能用于Pfu酶介導(dǎo)的PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
活性定義:One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribo
polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 72℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 20 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 2 mM MgSO4, 10 mM (NH4)2SO4, 10 mM KCl, 0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP.
純度:不含DNA內(nèi)切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,滿足常規(guī)PCR反應(yīng)要求。
酶儲存溶液:20 mM Tris-HCl (pH 8.2), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% (v/v) No
10×Pfu Buffer (with Mg2+):200 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 100 mM (NH4)2SO4, 20 mM MgSO4, 100 mM KCl,1% (v/v) Triton X-100, 1 mg/ml BSA。
失活或抑制:酚lǜ仿抽提可以使Pfu酶失活。
儲存條件:-20℃。
注意事項(xiàng):
1)由于PCR反應(yīng)非常靈敏可以擴(kuò)增目的基因序列超過1000萬倍,在使用Pfu酶時(shí)請注意避免微量待擴(kuò)增DNA的污染,并盡量考慮設(shè)置不加模板的空白對照以確認(rèn)是否有待擴(kuò)增DNA的污染。
2)Pfu DNA polymerase在擴(kuò)增DNA片斷時(shí)的出錯(cuò)率非常低,但其擴(kuò)增效率也比較低。對于出錯(cuò)率要求不高的情況,例如RT-PCR進(jìn)行定量或半定量,推薦使用Taq DNA polymerase。在擴(kuò)增效率和出錯(cuò)率需要兼顧的情況,可以選擇YTTaq DNA polymerase。在擴(kuò)增2kb以下DNA片斷時(shí),Pfu酶和Taq酶的擴(kuò)增效率相近。在準(zhǔn)確性要求很高的情況下,須選擇Pfu酶。
3)Pfu酶有3’至5’的外切酶活性,在沒有dNTP的情況下可以降解引物。因此Pfu酶一定要zuì后加入,并且要在冰浴上操作。
4)不能使用Taq酶的PCR Buffer來替代Pfu酶的PCR Buffer。
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