北京百奧萊博供應的動物組織/細胞線粒體提取試劑盒用于科研試驗，我公司的動物組織/細胞線粒體提取試劑盒品質上佳，經過多年的開發(fā)生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括動物組織/細胞線粒體提取試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產品名稱：動物組織/細胞線粒體提取試劑盒
英文名稱：Animal tissue/cell Mitochondrion Extraction Kit
產品貨號：XH009
產品規(guī)格：50T|100T

本試劑盒用于從動物細胞或組織中分離出完整而純化的線粒體。適合于動物軟組織（肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細胞的線粒體的制備。其制備物產量高，可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究。

試劑盒組成：

組份	50T	100T
Lysis Buffer	50mL	100 mL
Mito-Wash Buffer	25 mL	50mL
Store Buffer	5 mL	10 mL

保存條件：4℃可保存一個月，長期請置于-20℃保存。

操作步驟：
1．樣本處理
a．組織勻漿：稱取100~200mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內。加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨組織20次；
b．培養(yǎng)細胞勻漿：消化細胞，PBS洗滌，800×g 5~10min離心收集細胞。計數。每次提取需要5×10⁷個細胞，加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸細胞，將細胞懸液轉移到小容量玻璃勻漿器內，0℃冰浴研磨30~40次；
2．將組織或細胞勻漿物轉移到離心管，4℃，1000×g離心5min；
3．取上清，加入一新的離心管中，4℃，1000×g再次離心5min。
4．取上清，加入一新的離心管中，4℃，12,000×g離心10min。離心后的上清含胞漿成分，可從中提取胞漿蛋白。將上清轉移到新離心管，線粒體沉淀在管底；
5．在線粒體沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重懸線粒體沉淀，4℃，1000×g離心5min；
6．取上清，加入一新的離心管中，4℃，12,000×g離心10min。棄上清，高純度的線粒體沉淀在管底；
7．用50～100μL Store Buffer或合適的反應緩沖液重懸線粒體沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事項：
1．為保證獲得完整的線粒體，是全程低溫操作。第二是快速。第三，在不破壞亞細胞器的情況下破碎細胞是制備線粒體的zuì關鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細胞特別是貼壁培養(yǎng)細胞在用玻璃勻漿器勻漿時較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴密的研杵上下研磨培養(yǎng)細胞。
2．以離心力g計算正確的離心速度，不同的離心機可據此計算離心速度。
3．進行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解線粒體。

一般低溫度心機都有離心力顯示，如果沒有，可以用以下公式簡單的換算。
  G＝1.11×(10^-5)×R×[rpm]²
G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數來表示；[rpm]²即：轉速的平方；R為半徑，單位為厘米。

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名稱：Percoll
貨號：BTN131134
規(guī)格：250mL
Percoll是一種常用的低粘度的密度梯度介質，由直徑在15-30nm的硅膠顆粒組成，顆粒外包被了聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，為化學惰性，不會影響細胞的活性。

產品特點：
1．Percoll滲透壓很低(<20mosm/kg H2O)，粘度也很小，可形成高達1.3g／ml 密度。
2．采用預先形成的密度梯度時可在低離心力(200～1000g)于數分至數十分鐘內達到滿意的細胞分離結果。
3．離心后能形成1-1.3g/mL的密度梯度，可用于分離各種懸浮的細胞、線粒體、葉綠體和病毒(可小到70S)。
4．由于Percoll擴散常數低，所形成的梯度十分穩(wěn)定。此外，Percoll不穿透生物膜，對細胞害，因此廣泛用于分離細胞、亞細胞成分、細菌及病毒，還可將受損細胞及其碎片與完好的活細胞分離。
5．Percoll溶液高壓滅菌，必須進行不添加鹽或蔗糖。鹽的存在會引起percoll糊化，蔗糖的存在會引起焦糖化。

儲存條件：常溫運輸和保存，有效期五年(未開封狀態(tài))。

使用方法：
1．不同濃度(密度)Percoll溶液的制備：先用9 份Percoll與1份 8.5％ NaCl或1.5MPBS混合達到生理性滲透壓，然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀釋到所需濃度。

Percoll濃度(％)	70	60	50	40	30	20
比重g/ml	1.090	1.077	1.067	1.056	1.043	1.031

2．不連續(xù)密度梯度Percoll層的制備：先將試管壁用牛血清濕潤，除去多余血清，這種預處理可使逐層疊加的Percoll液平穩(wěn)沿管壁流下，使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長針頭注射器從高密度向低密度逐層放置，有時相鄰兩層Percoll 比重相差不大時，可將Percoll液放入注射器中，小針頭斜面緊貼管壁，任其自然慢慢流下。
3．裝樣：樣品體積和細胞濃度根據不同細胞而異，一般加樣體積不宜過大，細胞濃度也不可過高，否則會影響細胞的分離和回收。
4．離心：一般采用離心力為400g，時間20～25min。由于多層Percoll 之間密度差別不大，因此離心機加速、降速時要慢，要平穩(wěn)。
5．取樣：當所要分離的細胞大部分在兩層的界面時，可逐層去除Percoll液后收集界面部位的細胞;有時大部分細胞位于Percoll 層中,則需要逐層收集。收獲含有Percoll液的細胞經2次洗滌后可供培養(yǎng)或檢測用。

分離純化細胞舉例
1．富含NK活性大顆粒淋巴細胞(LGL)的純化:按順序由下向上逐層加50％、47.5％、45％、42.5％和40％五種不同密度的Percoll,如用10ml 試管(或塑料管)分離,每層Percoll約1.2～1.5ml，初步從外周血中分離的PBMC細胞1×10８懸于１ml培基中，按要求裝樣、離心和取樣。一般富含NK 殺傷活性的LGL細胞位于42.5％與45％Percoll界面以及上下二層的Percoll液中。
2．純化淋巴母細胞和除去死細胞：分別疊加50％和30％Percoll液。收取經PHA(或其它抗原、有絲分裂原)刺激PBMC,或含有較高比例異型的PBMC(如腎綜合征出血熱患者)，按要求裝樣、離心和取樣。位于管底的淋巴細胞為小淋巴細胞；兩層Percoll之間為淋巴母細胞，純度和回收率在80％以上，位于30％Percoll表面是死細胞。收獲淋巴母細胞可進行表型、結構以及功能的研究。

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