Hoechst 33342/PI由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品僅用于生物化學(xué)研究方面，我公司專注于細(xì)胞凋亡與增殖產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的Hoechst 33342/PI質(zhì)量可靠，批間差小，且價(jià)格公道，熱切盼望您選購(gòu)我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括Hoechst 33342/PI雙染試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：Hoechst 33342/PI雙染試劑盒
英文名稱：Hoechst 33342/PI Double Stain Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：SY0500
產(chǎn)品規(guī)格：100T

Hoechst 33342/PI 雙染試劑盒（Hoechst 33342/PI Double Stain Kit）采用Hoechst 33342和碘化丙啶（PI）雙染的方法以區(qū)分凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞的試劑盒。其檢測(cè)原理是：細(xì)胞核熒光染料Hoechst 33342可以穿透細(xì)胞膜，嵌入雙鏈DNA后釋放藍(lán)色熒光。對(duì)于正常細(xì)胞，其可少許進(jìn)入細(xì)胞膜使其染上低藍(lán)色。而凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞膜通透性增強(qiáng)，從而使得進(jìn)入凋亡細(xì)胞內(nèi)的Hoechst 33342明顯多于正常細(xì)胞，熒光強(qiáng)度比正常細(xì)胞要高。另外，細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)染色質(zhì)會(huì)固縮，從而使得染料能更有效和聚集的結(jié)合于DNA，并且凋亡細(xì)胞膜上的p-糖蛋白泵功能受損而不能有效的將Hoechst 33342排除到細(xì)胞外使其在細(xì)胞內(nèi)的積累增加，這些特征都使得凋亡細(xì)胞經(jīng)染色后熒光會(huì)比正常細(xì)胞明顯增強(qiáng)。但細(xì)胞核熒光染料PI不能穿透細(xì)胞膜完整的正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞，即活細(xì)胞對(duì)PI染料拒染。而對(duì)于壞死細(xì)胞，其細(xì)胞膜的完整性在早期即已喪失，可被PI染色。

經(jīng)上述兩種染料雙染后，使用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測(cè)時(shí)，正常細(xì)胞為弱紅色熒光＋弱藍(lán)色熒光，凋亡細(xì)胞為弱紅色熒光＋強(qiáng)藍(lán)色熒光，壞死細(xì)胞為強(qiáng)紅色熒光＋弱藍(lán)色熒光。

本試劑盒染色快速方便，可用一步法或者兩步法進(jìn)行染色。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，無(wú)需稀釋等配制過程，也無(wú)需再準(zhǔn)備其它任何溶液。本試劑盒足夠檢測(cè)100個(gè)樣品，每個(gè)樣品的細(xì)胞數(shù)量可達(dá)105-106個(gè)。

注意事項(xiàng)
1) Hoechst 33342、PI對(duì)人體有害，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)；
2) Hoechst 33342、PI需避光，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程盡量避光操作；
3) 熒光染料均存在淬滅情況，建議染色后需盡快檢測(cè)；
4) Hoechst 33342 與細(xì)胞孵育時(shí)間不宜過長(zhǎng)，一般控制在20min以內(nèi)。太長(zhǎng)容易引起該染料的發(fā)射光譜由藍(lán)光向紅光遷移，導(dǎo)致紅色熒光和藍(lán)色熒光比例改變。
5) 如果用于組織樣品檢測(cè)，則必須把組織消化制備成單細(xì)胞懸浮液后才可以進(jìn)行檢測(cè)。
6) 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期12個(gè)月

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名稱：細(xì)胞凋亡DNA Ladder提取試劑盒(柱式吸附)
貨號(hào)：YT121
規(guī)格：50次
本試劑盒是目前zuì的DNA Ladder抽提試劑盒之一。本試劑盒是針對(duì)細(xì)胞凋亡過程中產(chǎn)生的核小體間DNA鏈斷裂而設(shè)計(jì)的?？梢苑浅Ｓ行У爻樘醶uì小片段為180-200bp的DNA ladder，同時(shí)又可以抽提到zuì大50kb左右的基因組DNA。本試劑盒可以抽提50個(gè)樣品。

DNA ladder也稱DNA fragmentation，是細(xì)胞凋亡的一個(gè)重要指標(biāo)。通常觀察到DNA ladder，就可以判定細(xì)胞發(fā)生了凋亡。

樣品先被蛋白酶K消化，隨后加入適合DNA結(jié)合到純化柱上的緩沖液，然后加入到純化柱內(nèi)。通過高速離心，使DNA在穿過純化柱的瞬間，結(jié)合到純化柱上，隨后通過兩次洗滌去除各種雜質(zhì)，zuì后通過洗脫液把DNA洗脫下來(lái)。整個(gè)過程無(wú)需酚lǜ仿抽提，無(wú)需酒精沉淀，樣品裂解后僅需約15分鐘即可完成。

通過DNA純化柱方式抽提DNA ladder比用傳統(tǒng)的酚lǜ仿抽提酒精沉淀方法更加便捷，小片段DNA不容易損失。試劑盒提供了RNase A，可以獲得不含RNA的高純度總DNA，排除了RNA對(duì)DNA ladder觀察造成的干擾。

本試劑盒每次zuì多可以抽提20mg組織或200-350萬(wàn)個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞。樣品用量過多，反而會(huì)影響抽提效果。純化柱對(duì)于DNA的zuì大容量約為30微克。通常每200萬(wàn)Hela細(xì)胞或500萬(wàn)淋巴細(xì)胞可以抽提得到15-25微克總DNA，每25mg肝、腦、腎組織可以抽提得到10-30微克總DNA，每25毫克心、肺組織可以抽提得到5-10微克總DNA，每10mg脾組織可以抽提得到5-30微克總DNA。樣品的用量請(qǐng)勿超過純化柱的容量，樣品用量zuì好能保持在純化柱容量的70%或以下。當(dāng)然過少的樣品也不利于檢測(cè)到DNA ladder。

對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞的凋亡檢測(cè)，通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞就足夠用于DNA ladder的抽提和檢測(cè)。

試劑盒組份：
樣品裂解液A——————10ml
樣品裂解液B——————11ml
洗滌液I——————21ml(次使用前加入7ml無(wú)水乙醇)
洗滌液II——————16ml (次使用前加入24ml無(wú)水乙醇)
洗脫液——————22ml
蛋白酶K——————1.1ml
RNase A——————220μl
DNA純化柱及廢液收集管——————50套

注意事項(xiàng)：
1. 溫度較低時(shí)樣品裂解液A或樣品裂解液B中可能會(huì)有沉淀產(chǎn)生，屬正?，F(xiàn)象。使用前必須檢查一遍。如有沉淀，55℃水浴孵育使沉淀溶解，混勻后使用。
2. 次使用前洗滌液I需添加7ml無(wú)水乙醇，洗滌液II需添加24ml無(wú)水乙醇，混勻，并在瓶上做好標(biāo)記。
3. 本試劑盒需使用55℃或70℃水浴，請(qǐng)?zhí)崆白骱脺?zhǔn)備。
4. 除特別說明外，每次Vortex應(yīng)控制在5-10秒左右。
5. 本試劑盒所有操作均在室溫進(jìn)行，操作時(shí)無(wú)需冰浴。所有離心也均在室溫進(jìn)行。
6. 廢液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丟棄。

儲(chǔ)存條件：室溫，有效期一年。( 蛋白酶K需-20℃保存)

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