XH004 血液線粒體提取試劑盒

產(chǎn)品簡介
血液線粒體提取試劑盒是高品質(zhì)的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)研究產(chǎn)品,由北京百奧萊博供應(yīng),本產(chǎn)品用于生化實驗研究等領(lǐng)域,我公司專注于亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)研究產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng),為您提供的血液線粒體提取試劑盒質(zhì)量可靠,批間差小,且價格公道,熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示:包括血液線粒體提取試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:血液線粒體提取試劑盒
英文名稱:Blood Mitocho
產(chǎn)品貨號:XH004
產(chǎn)品規(guī)格:50T|100T
本試劑盒可用于從血液中分離完整而純化的線粒體。其制備物,可以被用于細(xì)胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。但不適用于進(jìn)一步DNA提取。
試劑盒組成:
| 組份 | 50T | 100T |
| 紅細(xì)胞裂解液(10X) | 100mL | 100mL×2 |
| 白細(xì)胞裂解液 | 50mL | 100mL |
| 線粒體清洗液 | 25mL | 50mL |
| 線粒體保存液 | 5mL | 10mL |
保存條件:4℃可保存3個月,長期保存可置-20℃。
操作步驟:
1.血液處理:
血液要求:非肝素鈉抗凝血,zuì好使用新鮮血液。對于陳舊血液,由于凍凝過程中冰晶已經(jīng)對細(xì)胞核膜和線粒體膜產(chǎn)生損傷,所以線粒體得率會大大減少,并且完整性也會降低。
a.對于無核紅細(xì)胞全血(如哺乳動物處周血),取血約5ml(適當(dāng)分成幾管),加入3倍體積的紅細(xì)胞裂解液(稀釋后的工作液,下同),混勻,800×g 5min離心收集白細(xì)胞。加入1-2ml紅細(xì)胞裂解液(稀釋后的工作液),吹打重懸白細(xì)胞,合并于一管中,800×g 5~10min離心收集白細(xì)胞。此時如果白細(xì)胞有可見紅色,可再次用少量(0.5ml)紅細(xì)胞裂解液洗細(xì)一次。
b.對于有核紅細(xì)胞全血(如禽類全血),取約200-300μl全血,800×g 5~10min離心收集全細(xì)胞,用生理鹽水或者PBS清洗兩次,留沉淀去上清。清洗時請用去尖吸頭吹打。
2.在收集到的細(xì)胞中,加入1.0mL冰預(yù)冷的白細(xì)胞裂解液重懸細(xì)胞,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi),0℃冰浴研磨20~40次;
3.勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管,4℃,1000×g離心5min;
4.取上清,加入一新的離心管中,4℃,1000×g再次離心5min(一共兩次離心,完整去核)。
5.取上清,加入一新的離心管中,4℃,12,000×g離心10min。離心后的上清含胞漿成分,可從中提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管,線粒體沉淀在管底;
6.在線粒體沉淀中加入0.5 mL線粒體清洗液重懸線粒體沉淀,4℃,1000×g離心5min(再次去核);
7.取上清,加入一新的離心管中,4℃,12,000×g離心10min。棄上清,高純度的線粒體沉淀在管底;
8.用50 -100μL線粒體保存液或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線粒體沉淀,立即使用或-70℃保存。
注意事項:
為保證獲得完整及盡可能多的線粒體,勻漿條件要示:是全程低溫操作。第二是快速。第三,如有條件可將勻漿后的碎片在顯微鏡下觀察。
一般低溫度心機(jī)都有離心力顯示,如果沒有,可以用以下公式簡單的換算。
G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2
G為離心力,一般以g(重力加速度)的倍數(shù)來表示;[rpm]2即:轉(zhuǎn)速的平方;R為半徑,單位為厘米。
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名稱:動物線粒體提取試劑盒
貨號:HR0233
規(guī)格:50T|100T
線粒體(mitochondria)是真核細(xì)胞中產(chǎn)生能量的重要細(xì)胞器。細(xì)胞中的能源物質(zhì)-脂肪、糖、部分氨基酸在此進(jìn)行zuì終的氧化,并通過偶聯(lián)磷酸化生成ATP,供給細(xì)胞生理活動之需。
對線粒體結(jié)構(gòu)與功能的研究通常是在離體的線粒體上進(jìn)行的,本試劑盒用簡便快速的方法即可在40分鐘內(nèi)提取得到線粒體。
本試劑盒可用于各種動物細(xì)胞和實體軟、硬組織樣本的線粒體提取。不能用于冷凍樣品的線粒體提取。
儲存條件:2-8℃保存。
有效期:一年。
注意事項:
●本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
● 禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
● zuì好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底清除殘留清潔劑。
● 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
試劑盒以外自備試劑和儀器:
● 移液器、吸頭 ●離心機(jī)及離心管 ● 渦旋振蕩器 ●冰箱,冰盒
使用方法:
使用注意事項:
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
● 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
● zuì好使用 Dounce 勻漿器勻漿,如果沒有Dounce 勻漿器,用普通1ml 玻璃勻漿器勻漿也可。
細(xì)胞線粒體提取:
1.取1-2×107個細(xì)胞,在4℃,500×g條件下離心2-3分鐘,小心吸取培養(yǎng)基,盡可能吸干,收集細(xì)胞;
2.用冷 PBS 洗滌兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。
3.加入400μl冷的試劑A,置冰上10分鐘。
4.用 Dounce勻漿器勻漿30-40下,然后在4℃,500×g條件下離心5分鐘。
5.快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。
6.在 4℃,11000×g以上條件下離心20分鐘。
7.在沉淀中加入400μl冷的試劑B,混勻。
8.在 4℃,11000×g以上條件下離心20分鐘。
9.棄上清,沉淀用線粒體保存液重懸。
10.即得到線粒體樣品,置冰箱備用或直接用于下游實驗。
組織線粒體提?。?br /> 1.取50-100mg新鮮動物組織樣本,用PBS洗滌干凈。
2.用剪刀盡可能剪碎,用冷 PBS 洗滌兩次。
3.加入 400μl冷的試劑A,置冰上10分鐘。
4.用 Dounce勻漿器勻漿30-40下,然后在4℃,500×g條件下離心5分鐘。
5.快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。
6.在 4℃,11000×g以上條件下離心20分鐘。
7.在沉淀中加入400μl冷的試劑B,混勻。
8.在 4℃,11000×g以上條件下離心20分鐘。
9.棄上清,沉淀用線粒體保存液重懸。
10.即得到線粒體樣品,置冰箱備用或直接用于下游實驗。
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