Pfu DNA聚合酶是高品質(zhì)的核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品僅用于生物化學(xué)研究方面，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價(jià)格，深為用戶稱道，了解更多Pfu DNA聚合酶等核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括Pfu DNA聚合酶在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：Pfu DNA聚合酶
英文名稱：Pfu DNA Polymerase
產(chǎn)品貨號(hào)：WH0068
產(chǎn)品規(guī)格：250U|500U

本制品是從克隆有Pyrococcus furiosis DNA Polymerase基因的大腸桿菌中分離純化的，Pfu DNA Polymeras具有5′-3′ DNA聚合酶活性和3′-5′的外切酶活性，能糾正DNA擴(kuò)增過程中產(chǎn)生的堿基錯(cuò)配。Pfu酶是目前已發(fā)現(xiàn)的所有耐高溫DNA Polymerase中出錯(cuò)率zuì低的。其PCR產(chǎn)物為平端，可加A處理再與T載體連接或使用平末端克隆載體。本制品可用于DNA的高保真擴(kuò)增，如基因表達(dá)克隆、基因定點(diǎn)突變、細(xì)胞內(nèi)基因點(diǎn)突變的分析（SNP）和末端補(bǔ)平等。

產(chǎn)品組成：

組分	WH0068-1	WH0068-2
Pfu DNA Polymerase	250U	500 U
10× Pfu Buffer	1.8ml	1.8ml

10×Pfu Buffer
200mM Tris-HCl （pH 8.8);100 mM KCl;100 mM（NH4)2SO4;20 mM MgSO4;其它成分。
10×Pfu Buffer分為含Mg2+和不含Mg2+兩種，可自選。不含Mg2+的Buffer另外配有25 mM Mg2+。如果沒有特別，通常提供的為含有Mg2+的Buffer

儲(chǔ)存條件：-20℃保存

活性定義：
1單位（U）Pfu DNA Polymerase活力定義為在74℃、30min內(nèi)，以活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，將10nmol脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。

質(zhì)量控制：
SDS-PAGE檢測純度大于99%；經(jīng)檢測無外源核酸酶活性；PCR方法檢測無宿主殘余DNA；能有效地?cái)U(kuò)增人基因組中的單拷貝基因；室溫存放一周，無明顯活性改變。

注意事項(xiàng)：
1．Pfu酶具有3"-5"的外切酶活性，所以Pfu酶擴(kuò)增時(shí)延伸速度遠(yuǎn)比Taq酶低，應(yīng)根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的長度設(shè)置相應(yīng)的延伸時(shí)間，一般情況下Pfu酶的延伸速度為每分鐘0.5-1 Kb；同時(shí)Pfu酶的3"-5"的外切酶活性可能降解引物，所以應(yīng)先加dNTPs后，再加Pfu酶到反應(yīng)體系中，并立即進(jìn)行PCR反應(yīng)。
2．用Pfu酶擴(kuò)增時(shí),引物的純度要求較高，引物長度大于18個(gè)堿基，Tm在55-80℃之間，引物濃度在0.1-0.5μM之間，比Taq酶略高。
3．Pfu酶的熱穩(wěn)定性比Taq酶好，對于GC含量很高的模板，變性溫度可以提高到98℃，對Pfu酶的活性無影響。

使用舉例：
注意：以下舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)系統(tǒng)，僅供參考。實(shí)際反應(yīng)條件因模板、引物等的結(jié)構(gòu)不同而各異，需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物長短等具體情況，設(shè)定zuì佳反應(yīng)條件。以人基因組DNA為模板，擴(kuò)增1 kb的片段。
1.PCR反應(yīng)體系的建立，50μl體系如下（可根據(jù)比例放大或縮小體系)：

成份	體積
Template	＜1μg
Primer 1（10 μM）	1 μl
Primer 2（10 μM）	1 μl
10×Pfu Buffer	5 μl
dNTP Mixture（2.5 mM)	4 μl
Pfu （2.5 U/μl)	0.5-1 μl
ddH2O	補(bǔ)至50μl

2．PCR反應(yīng)循環(huán)的設(shè)置：
  
3．結(jié)果檢測：反應(yīng)結(jié)束后取5 μl反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測。

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