BSA溶液(PCR級)是高品質(zhì)的核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科學(xué)研究，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價位合理，需要BSA溶液(PCR級)等核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括BSA溶液(PCR級)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：BSA溶液(PCR級)
英文名稱：BSA Solution(PCR Grade)
產(chǎn)品貨號：RFT161
產(chǎn)品規(guī)格：5×1ml

PCR反應(yīng)體系中常添加BSA，它能降低模板貼附管壁的數(shù)量，使得有更多的模板參與擴(kuò)增。另外，BSA能降低引物二聚體的形成。在擴(kuò)增含有黑色素等PCR抑制劑的古DNA或模版時，BSA具有一定的促進(jìn)作用。PCR反應(yīng)中BSA終濃度在0.01μg/μl～0.1 μg/μl。

使用方法：
1、-20℃保存的BSA溶液常溫融化，混勻。
2、根據(jù)根據(jù)PCR反應(yīng)體系，加入適量體積的BSA。

	20μl 體系	反應(yīng)體系終濃度
10×PCR Buffer	2μl	1×
BSA(10mg/ml)*	0.02-0.2μl	0.1-0.01 μg/μl
模板	0.05-0.5μg	as you wish
上游引物 10μM	0.5μl	0.2μM
下游引物 10μM	0.5μl	0.2μM
dNTP10mM	0.5μl	200μM
Taq	0.5-1μl	2.5-5 U
滅菌水	up to 20μl

注：不同模板，不同片段的擴(kuò)增可能需要不同濃度的BSA，可以適當(dāng)調(diào)節(jié)BSA加入體積，找到適合自己反應(yīng)的BSA濃度。

儲存條件：-20℃，有效期一年。

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名稱：即用型熒光定量PCR試劑盒
貨號：BTN90408
規(guī)格：1mL
本產(chǎn)品是基于熒光染料檢測的即用型PCR試劑盒，可以對靶片段進(jìn)行實時定量PCR分析。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2及熒光染料DNAgreen等所有實時定量PCR所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行實時定量PCR反應(yīng)和HRM分析，具有廣泛的用途。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 方便，用戶只需準(zhǔn)備模板和引物既可以進(jìn)行實時定量PCR實驗和HRM(High Resolution DNA Melt Curve Analysis)分析。而基于SYBR Green I和LC Green染料的qPCR mix則不能同時用于上述兩種實驗。
2. 使用第三代飽和型熒光染料，信號強(qiáng)，不會抑制PCR反應(yīng)。
3.快捷，即用型的預(yù)配液使加樣操作步驟大大簡化，避免了交叉污染，降低實驗誤差。
4. 各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化，反應(yīng)的靈敏度高，特異性強(qiáng)。能檢測到濃度為50拷貝/mL的靶分子。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易錯PCR Mix，10×	300μl
易錯PCR專用dNTP，10×	300μl
MnCl2，5mM	300μl
說明書	1份

儲存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為6個月。

使用方法：

1.以20μl的qPCR反應(yīng)體系為例：在一干凈的PCR管中，加入下列成分：

反應(yīng)體系成分	20μl體系	終濃度
qPCR MagicMix，2×	10μl	1×
自備引物一	xμl	0.1-0.5μM
自備引物二	xμl	0.1-0.5μM
自備模板	xμl
自備ROX	2μl	(可以不加)
補(bǔ)超純水到	20μl

放入熒光PCR儀中進(jìn)行擴(kuò)增，并在退火或延長步驟中記錄熒光信號。
注意：
a)通常引物濃度以0.2μm可得到較好結(jié)果，可以終濃度0.1-1.0μm作為設(shè)定范圍的參考；通常DNA模板的量以10-100 ng基因組DNA或1-10 ng cDNA為參照，因不同物種的模板中含有的目的基因拷貝數(shù)不同，可對模板進(jìn)行梯度稀釋，以確定zuì佳的模板使用量。
b)ROX 校正染料：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三種型號的熒光PCR儀器，則需用自備的ROX進(jìn)行Ct值校正。對ABI 7700和7900，ROX的zuì佳濃度為1×(即在每20μl反應(yīng)體系中加2μl 10×ROX)。對ABI 7500，ROX的zuì佳濃度為0.05-0.1×(每20μl反應(yīng)體系加0.1-0.2μl 10×ROX；也可將10×ROX稀釋到1×，然后每個反應(yīng)體系加入1-2μl 1×ROX)。ROX會在溶解曲線中產(chǎn)生噪音，因此，如果出現(xiàn)了雜峰，將軟件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”選項取消打勾，然后重新分析數(shù)據(jù)。
對于iCycler IQ，MJ Opticon，MJ Chromo4，MX3000，MX4000，RotorGene3000，RotorGene 6000和LightCycler 480等型號的熒光PCR儀器，ROX不是必須的，但加入的話也不會影響整個PCR分析。

2. 循環(huán)步驟：根據(jù)擴(kuò)增子的性質(zhì)和儀器性能，從以下三個過程中任選一個進(jìn)行擴(kuò)增。
兩步快速循環(huán)法：適用于引物Tm值設(shè)計為60℃的反應(yīng)

循環(huán)步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
酶活化	95℃	10min	1
變性	95℃	15s	35-40
退火&延伸	60℃	1min

注意：本產(chǎn)品所采用的熱啟動酶須在預(yù)變性95℃、10 min條件下實現(xiàn)酶的活化。退火溫度請以60-64℃作為設(shè)定范圍的參考，發(fā)生非特異性反應(yīng)時，可提高退火溫度。
三步快速循環(huán)法：適用于延伸步驟溫度高于退火步驟的PCR(長引物PCR)

循環(huán)步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
酶活化	95℃	10min	1
變性	95℃	10s	35-40
退火	56-64℃	30s
延伸	72℃	32s

注意：
·退火溫度：建議采用兩步法PCR，退火溫度60℃進(jìn)行反應(yīng)。若提高反應(yīng)特異性，可提高退火溫度，以60-64℃作為設(shè)定范圍的參考。若因使用Tm值較低的引物等原 因，得不到良好的實驗結(jié)果時，可嘗試進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增，三步法的退火溫度請以56℃-64℃的范圍作為設(shè)定參考。
·延伸溫度：延伸溫度設(shè)為72℃通?？梢蕴岣邤U(kuò)增效率。但是，對于AT含量大于70%的擴(kuò)增子來說，延伸溫度設(shè)為60℃為宜。
通用循環(huán)法：這種循環(huán)方法適用于幾乎所有的熒光PCR儀，也適用于用快速循環(huán)法不能擴(kuò)增的模版。

循環(huán)步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
酶活化	96℃	10min	1
變性	96℃	15s	35-40
退火&延伸	60℃	1min

3. 數(shù)據(jù)采集
具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在沒結(jié)合DNA時，zuì大吸收光譜在471nm，結(jié)合DNA時的zuì大吸收光譜在500nm，zuì大發(fā)射光譜在530nm。

注意事項：
1. 如果使用iCycler，可以不加入FAM。
2. 如果使用Roche LightCycler的玻璃毛細(xì)管進(jìn)行PCR，需加入終濃度為0.5mg/mL的自備BSA。

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貨號	名稱	規(guī)格
BTN70905	2%明膠溶液(PCR級)	1.5mL
YT383	PCR Master Mix (含綠色電泳染料)	400次|2000次10000次
YT389	dNTP套裝(100mM)	4×50μl
WE0112	2×BaldStar Taq MasterMix(含染料)	5ml
WE0131	cDNA鏈合成試劑盒	100次
WE0148	一步法逆轉(zhuǎn)錄實時熒光定量PCR試劑盒	100次

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