我公司致力于為客戶提供高純度、低成本的活性重組蛋白，包括2×RoomTop Taq PC在內(nèi)的各類受體、細(xì)胞因子、生長因子、轉(zhuǎn)錄因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。...

特別提示：包括2×RoomTop Taq PCR MasterMix在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：2×RoomTop Taq PCR MasterMix
產(chǎn)品貨號：JN0035
產(chǎn)品規(guī)格：1ml×5

  本制品是以2×Taq PCR MasterMix為基礎(chǔ)，與穩(wěn)定劑整合后研發(fā)成功的預(yù)混試劑，具有佳的保存穩(wěn)定性，室溫存放2個月，4℃存放6個月后，依然能保持佳的擴增性能。2×RoomTop Taq PCR MasterMix保持了2×Taq PCR MasterMix試劑的特點，擴增長度可達(dá)8kb，能對4kb及其以下長度的片段進行地擴增。使用時只需加入模板和引物并稀釋到一倍濃度即可進行PCR反應(yīng)，大大地簡化了操作過程，減少了 PCR操作過程中的污染。2×RoomTop Taq PCR MasterMix提供快速上樣型（含高純度藍(lán)色染料）及不含染料的普通型兩種形式供您選擇?？焖偕蠘有驮赑CR反應(yīng)完成后可直接電泳，節(jié)省時間。經(jīng)測試，高純度染料的加入不影響PCR反應(yīng)。

產(chǎn)品特點：
1、可置于實驗臺上的PCR鑒定試劑。
2、室溫存放2個月，4℃存放6個月，擴增性能不受影響。
3、可直接用于菌落、菌液等PCR鑒定實驗。

產(chǎn)品用途：常規(guī)PCR鑒定；小片段DNA克??；PCR產(chǎn)物加A。

使用建議：
1、使用本試劑擴增得到的PCR產(chǎn)物3′ 端有一突出"A"堿基，可直接克隆于 T載體中。
2、PCR反應(yīng)液請在冰上配制，然后置于PCR儀上進行。這種冷啟動法（Cool Start Method）可增加PCR擴增的特異性，得到良好的PCR結(jié)果。
3、使用PCR克隆目的片段時，為減少PCR過程中的隨機突變，可適量增加模板量，減少PCR循環(huán)（如20至25次循環(huán)）。

應(yīng)用實例：

圖例一）在50μl 體系中，使用室溫保存不同 時間后2×RoomTop Taq PCR Mix試劑對小鼠基因組1.6kb片段進行擴增
泳道M：DNA Ladder 2000 Plus
泳道1：0周 泳道2：2周
泳道3：4周 泳道4：6周
泳道5：8周 泳道6：10周

常用反應(yīng)體系(50μl)：

組分	體積
2×PCR MasterMix*	25μl
上游引物	0.2-1.0μM(終濃度)
下游引物	0.2-1.0μM(終濃度)
模板	1-50ng（質(zhì)粒）
	10ng-1μg(基因組)
ddH2O	至50μl
*Mg2+終濃度為2mM

常用PCR循環(huán)：

當(dāng)擴增片段＜3K：
94℃	10分鐘
30次循環(huán)	94℃，20秒 57℃ 20秒 72℃根據(jù)產(chǎn)物長度調(diào)整，60秒/kb
72℃	5分鐘
4℃	保溫
當(dāng)擴增片段≥3K（推薦引物長度≥30bp）：
94℃	10分鐘
30次循環(huán)	94℃，5秒 68℃ 根據(jù)產(chǎn)物長度調(diào)整，60秒/kb
72℃	5分鐘
4℃	保溫

PCR MasterMix選購指南：

編號	產(chǎn)品名稱	特點
適用于菌落鑒定、菌液鑒定及常規(guī)PCR鑒定實驗的Mix系列
JN0030	2×Taq PCR MasterMix	高PCR Mix，使用簡便，擴增靈敏度高
JN0034	2×Complex Taq PCR MasterMix	JN0030改進版，性能更均衡，適用面更廣
JN0040	2×Fast Taq PCR MasterMix	zuì快速的PCR試劑，常規(guī)PCR鑒定45分鐘內(nèi)知道結(jié)果
JN0035	2×RoomTop Taq PCR MasterMix	可放在手邊的PCR試劑，室溫穩(wěn)定存放60天
JN0036	2×RoomTop Fast Taq PCR MasterMix	室溫穩(wěn)定存放60天，高速PCR試劑，常規(guī)PCR鑒定45分鐘內(nèi)知道結(jié)果
適用于一些較難擴增的PCR條帶的鑒定及短片段克隆
JN0032	2×Taq Plus PCR MasterMix	擴增效率更高及較好的保真度
JN0038	2×Hot Start Taq PCR MasterMix	采用熱啟動Taq，可獲得很好的特異性
JN0041	2×Ultra Taq PCR MasterMix	高速擴增酶，優(yōu)化配方，解決PCR擴增難題的，靈敏度高
高保真酶試劑，適用于長片段基因克隆
JN0031	2×Pfu PCR MasterMix	采用高保真酶，適用于基因克隆
JN0043	2×Fast Pfu PCR MasterMix	采用改良型高保真酶，更好的擴增效果，4倍擴增速度；擴增迅速
防止PCR產(chǎn)物二次污染、高檢測靈敏度的PCR試劑
JN0047	2×PCR MasterMix(防污染)	采用dUTP/UDG酶系統(tǒng)，從根本上杜PCR產(chǎn)物二次污染
JN0033	2×Genotyping PCR Kit（nomal）	高檢測靈敏度，可達(dá)到普通PCR試劑102至104倍擴增靈敏度

PCR MasterMix性能對比表：

名稱	編號	擴增時間	擴增長度	是否有3"-A	基因組擴增
2×Taq PCR MasterMix	JN0030	1min/kb	≤8kb	√	+
2×RoomTop Taq PCR MasterMix	JN0035	1min/kb	≤8kb	√	++
2×Complex Taq PCR MasterMix	JN0034	1min/kb	≤8kb	√	+
2×Fast Taq PCR MasterMix	JN0040	15s/kb	≤8kb	√	+
2×RoomTop Fast Taq PCR MasterMix	JN0036	15s/kb	≤8kb	√	++
2×Ultra Taq PCR MasterMix	JN0041	15s/kb	≤8kb	√	+++
2×Taq Plus PCR MasterMix	JN0032	1min/kb	≤20kb	√	++++
2×Ultra Taq Plus PCR MasterMix	JN0042	15s/kb	≤30kb	√	++++
2×Hot Start Taq PCR MasterMix	JN0038	1min/kb	≤8kb	√	++++
2×Hot Start Taq Plus PCR MasterMix	JN0039	1min/kb	≤20kb	√	++++
2×Pfu PCR MasterMix	JN0031	1min/kb	≤6kb	×	+
2×Fast Pfu PCR MasterMix	JN0043	30min/kb	≤12kb	×	+
2×SYBR Green Realtime PCR MasterMix	JN0049	1min/kb	≤8kb	√	++
2×Genotyping PCR Kit（Normal）	JN0033	1min/kb	≤8kb	√	+++++
2×Genotyping PCR Kit（Fast）	JN0044	15s/kb	≤8kb	√	+++++
2×PCR MasterMix(防污染)	JN0047	1min/kb	≤8kb	√	+

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貨號	名稱	規(guī)格
BTN131176	石蠟包埋組織直接RT-PCR試劑盒(免RNA提取)	30次
BTN131178	DNA Shuffling試劑盒	10次
BTN91107	SP6體外轉(zhuǎn)錄試劑盒	50次
YT386	dCTP溶液(100mM)	250μl
YT398	cDNA第二鏈合成試劑盒	10次
WE0120	血液直接PCR擴增試劑盒	50μl×40次|50μl×200次

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名稱：dCTP溶液(100mM)
貨號：YT386
規(guī)格：250μl
dCTP即2"-deoxycytidine 5"-triphosphate，中文名為脫氧胞苷三磷酸，常用于PCR、real-time PCR、RT-PCR、cDNA或普通DNA合成、引物延伸反應(yīng)、DNA測序、DNA標(biāo)記等各種常規(guī)分子生物學(xué)反應(yīng)。

分子式：C9H13N3O13P3Na3
分子量：533.1(酸形式的分子量為467.1)
dCTP的zuì大吸收波長：271nm。

本dCTP溶液用超純水配制，并用高純度NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0，濃度為100mM，即100mmol/L。
本dCTP溶液不含DNase、RNase、phosphatase和蛋白酶。
本dCTP溶液經(jīng)測試，可以直接用于PCR等各種常規(guī)分子生物學(xué)反應(yīng)。

儲存條件：-20℃。

名稱：Pfu DNA Polymerase
貨號：WE0107
規(guī)格：500U
  Pfu DNA Polymerase是通過大腸桿菌表達(dá)純化的重組酶，具有5"-3"DNA聚合酶活性和5"-3"外切核酸酶活性的同時具有3"-5"外切核酸酶活性，因此在DNA擴增過程中具有糾錯能力，是目前發(fā)現(xiàn)的錯配率zuì低的耐高溫DNA Polymerase。該酶與Taq DNA Polymerase相比具有更好的熱穩(wěn)定性，對于高GC含量模板，提高變性溫度對它活性無影響。使用本產(chǎn)品擴增得到的PCR產(chǎn)物的3"端不帶有“A”堿基，不能直接用于T/A克隆，如需進行T/A克隆則需要在其末端添加“A”或用平末端載體進行克隆。本產(chǎn)品適用于基因克隆、基因定點突變、SNP和末端補平等實驗。

產(chǎn)品組成：

組份	500U
Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl	100μl
10×PCR Buffer	1.8ml

注意：本產(chǎn)品的10×PCR Buffer中含有15 mM鎂離子。

活性定義：
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，在74℃，30分鐘內(nèi)，將10 nmol脫氧核苷酸摻入到酸性不溶物質(zhì)所需的酶量定義為1個活性單位(U)。

質(zhì)量控制：
1、經(jīng)過多次柱純化，SDS-PAGE檢測其純度大于99%；
2、經(jīng)檢測無外源核酸酶活性；
3、PCR方法檢測無宿主殘余DNA；
4、能有效地擴增人基因組中的單拷貝基因；
5、室溫存放一個月，無明顯活性改變。

使用方法：
以下舉例為以人基因組DNA為模板，擴增1 kb的片段的PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，實際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進行相應(yīng)的改進和優(yōu)化。

1、PCR反應(yīng)體系

試劑	50μl反應(yīng)體系	終濃度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)用Pfu酶擴增時，引物的純度要求較高，引物長度大于18個堿基，引物濃度請以終濃度0.1-1.0μM作為設(shè)定范圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。
2)Pfu酶3"-5"外切酶活性可能降解引物，所以應(yīng)先加dNTP后，再加Pfu酶到反應(yīng)體系中，并立即進行PCR反應(yīng)。

2、PCR反應(yīng)條件

步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94℃	2 min
變性	94℃	30 s	25-35 個循環(huán)
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
終延伸	72℃	5 min

注意：
1)Pfu酶的熱穩(wěn)定性比Taq酶好，對于GC含量很高的模板，變性溫度可以提高到98℃，對Pfu酶的活性無影響。
2)一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度Tm低5℃，無法得到理想的擴增效率時，適當(dāng)降低退火溫度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，提高退火溫度，由此優(yōu)化反應(yīng)條件。
3)Pfu酶具有3"-5"外切酶活性，所以Pfu酶擴增時延伸速度遠(yuǎn)比Taq酶低，延伸時間根據(jù)所擴增片段大小設(shè)定，本產(chǎn)品的擴增延伸速率為1 kb/min。
4)可根據(jù)擴增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，錯配機率會增加，非特異性背景嚴(yán)重。所以在保證產(chǎn)物得率的前提下應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)。
5)本產(chǎn)品具有3"-5"外切核酸酶活性，PCR產(chǎn)物3’端不帶“A”,不能直接用于T/A克隆，如需進行T/A克隆則需要在其末端添加“A”或用平末端載體進行克隆。

儲存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融。

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