SY0034 熱啟動(dòng)PCR Master Mi

北京百奧萊博供應(yīng)的熱啟動(dòng)PCR Master Mix(含染料)僅用于生物化學(xué)研究方面,我公司專注于核酸擴(kuò)增(PCR)產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng),為您提供的熱啟動(dòng)PCR Master Mix(含染料)質(zhì)量可靠,批間差小,且價(jià)格公道,熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...
特別提示:包括熱啟動(dòng)PCR Master Mix(含染料)在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:熱啟動(dòng)PCR Master Mix(含染料)
英文名稱:HotStart PCR Master Mix (With Dye)
產(chǎn)品貨號(hào):SY0034
產(chǎn)品規(guī)格:1ml×5
HotStart PCR Master Mix是即用型的PCR預(yù)混合溶液,含有HotStart DNA Polymerase,dNTP以及優(yōu)化的緩沖體系,只需加入引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增,大大簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)的操作步驟,提高了高通量操作和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性。Mix中加入電泳緩沖液和染料,使得PCR產(chǎn)物可以直接進(jìn)行電泳,染料的存在不會(huì)干擾擴(kuò)增效率。體系中含有的保護(hù)劑使得Mix經(jīng)過反復(fù)凍融后仍可維持酶的活性以及產(chǎn)品的穩(wěn)定性。PCR產(chǎn)物具有3’-dA突出端,可輕松克隆至T載體。
活性定義:用活性化的大馬哈魚精子作為模板/引物,在74oC,30min內(nèi)攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個(gè)活性單位(U)。
質(zhì)量控制
核酸外切酶殘留檢測(cè):20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 oC下孵育1小時(shí),DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
核酸外內(nèi)酶殘留檢測(cè):20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 oC下孵育1小時(shí), DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
大腸桿菌殘留DNA檢測(cè): 50 μl體系中,以ddH2O為模板,擴(kuò)增E.coil 16s rDNA基因。35個(gè)循環(huán)后擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1% 瓊脂糖凝膠電泳,EB染色,無擴(kuò)增條帶。
功能檢測(cè):50 μl體系中,以30 pg人基因組DNA為模板擴(kuò)增α-1-antitrypsin基因。35個(gè)循環(huán)后取10% PCR產(chǎn)物進(jìn)行1% 瓊脂糖凝膠電泳,EB染色,觀察到單一的360 bp條帶。
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名稱:25mM氯化錳溶液(PCR級(jí)MnCl2溶液)
貨號(hào):BTN130307
規(guī)格:5mL
本產(chǎn)品為專門用于易錯(cuò)PCR的MnCl2水溶液,濃度為25mM,可用于調(diào)節(jié)MnCl2的zuì佳濃度。由于Mg2+在PCR過程中可以穩(wěn)定非互補(bǔ)的堿基對(duì),Mn2+能夠降低聚合酶對(duì)模板的特異性,因而調(diào)整兩種離子的濃度,可獲得不同突變頻率的多樣性文庫。
氯化錳分子量為125.8,CAS號(hào)為7773-01-5,水合氯化錳外觀為玫瑰色單斜晶體;無水氯化錳外觀為桃紅色結(jié)晶。密度為2.977g/cm3。熔點(diǎn)是650℃。在高于熔點(diǎn)溫度下升華。沸點(diǎn)1190℃。易溶于水,溶于醇,不溶于醚。
儲(chǔ)存條件:低溫運(yùn)輸、-20℃保存,有效期一年。
名稱:一管式反轉(zhuǎn)錄試劑盒
貨號(hào):BTN170403
規(guī)格:10次
本產(chǎn)品是一管式反轉(zhuǎn)錄預(yù)混Mix,內(nèi)含反轉(zhuǎn)錄鏈合成所需的所有試劑(MMLV、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、反應(yīng)Buffer等),用戶只需加入模板 RNA和RNase-Free 水即可進(jìn)行反應(yīng)。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1. cDNA的合成更加方便,用戶只需準(zhǔn)備模板和水即可進(jìn)行反應(yīng)。
2.快捷,操作步驟已經(jīng)zuì大限度地簡(jiǎn)化,能減少污染,降低實(shí)驗(yàn)誤差。
3. 效率高,特殊優(yōu)化的oligo dT和N6 隨機(jī)引物配比,反轉(zhuǎn)錄效率高。
4. 速度快,只需42℃,20分鐘即可完成cDNA 鏈的合成。
5. 能夠用于GC含量高,二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA 模板,合成cDNA片段長(zhǎng)度可達(dá)12kb。
6. 兼容性好,合成的cDNA可直接用于熒光定量PCR反應(yīng),靈敏度高、穩(wěn)定性好。
試劑盒組成:
| 成分 | 規(guī)格 |
| 2×RT MasterMix | 0.1ml |
| RNase-Free 水 | 1ml |
| 說明書 | 1份 |
儲(chǔ)存條件:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1. 解凍后顛倒輕彈混勻各組分,以20μL 體系為例,按下表加入(2×RT Master Mix很粘稠,取用前請(qǐng)短暫離心,并避免吸頭外壁沾附損失):
| 10μl | |
| Total RNA/mRNA 模板(自備) | 50ng-2μg/5-200ng |
| 補(bǔ)RNase-Free 水到 | 20μl |
注意:對(duì)于二級(jí)結(jié)構(gòu)很復(fù)雜的RNA 模板,推薦使用變性步驟,即在操作步驟之前,將模板RNA在65℃孵育5分鐘后迅速轉(zhuǎn)移到冰上,再進(jìn)行下一步操作。
2. 輕輕混勻,42℃孵育20分鐘進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
注意:對(duì)亍二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜或者GC含量高的模板,可以提高溫度至50℃,以增強(qiáng)反轉(zhuǎn)錄效率。
3. 85℃加熱5秒鐘滅活反轉(zhuǎn)錄酶置冰上備用(更長(zhǎng)時(shí)間保存請(qǐng)置于-20℃)。
注意事項(xiàng):
1. 實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)注意避免RNase污染,防止RNA降解或?qū)嶒?yàn)中的交叉污染。
2. 使用之前請(qǐng)完全溶解并充分混勻,以防因鹽離子濃度丌均影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
3. 使用后應(yīng)盡快放回-20℃,避免反復(fù)凍融。
4. RNA模板的完整性對(duì)cDNA合成效率起著決定性作用,因此請(qǐng)選擇可靠的RNA提取/純化方法。
5. 如果擴(kuò)增片段較長(zhǎng)或者RNA結(jié)構(gòu)復(fù)雜,為了加強(qiáng)轉(zhuǎn)錄效果,可以將RNA單獨(dú)置于65-70℃加熱5-10分鐘后再加入體系。
6. 操作人員請(qǐng)帶口罩和一次性手套,并經(jīng)常更換手套。
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