沙門(mén)菌及痢疾桿菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，我公司專(zhuān)注于細(xì)菌PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的沙門(mén)菌及痢疾桿菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒質(zhì)量可靠，批間差小，且價(jià)格公道，熱切盼望您選購(gòu)我們的產(chǎn)品。...

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產(chǎn)品名稱(chēng)：沙門(mén)菌及痢疾桿菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：SYA079
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒



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名稱(chēng)：炭疽桿菌單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒(分別有檢測(cè)Capa/Rob/PAG的試劑盒)
貨號(hào)：SYA014
規(guī)格：48次/盒
一、簡(jiǎn)介
本試劑盒用三對(duì)炭疽桿菌特異性引物(Cap/robB/pagA)，各結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對(duì)炭疽桿菌核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

二、用途
該試劑盒適用于檢測(cè)皮膚水泡液、咽拭子、可疑食物等樣本中的炭疽桿菌特異性核酸序列(pX01質(zhì)粒-pagA基因；pX02質(zhì)粒-cap基因；染色體-rpoB基因)進(jìn)行擴(kuò)增，用于炭疽桿菌感染的輔助診斷，其檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考。

三、試劑盒組成(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
反應(yīng)液(qPCR MIX) 1管 480μL/管
pagA熒光引物和探針 1管 240μL/管
Cap熒光引物和探針 1管 240μL/管
rpoB熒光引物和探針 1管 240μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
陰性對(duì)照(NTC) 1管 50μL/管
陽(yáng)性對(duì)照(PTC) 1管 50μL/管

四、熒光PCR儀器適用范圍
ABI系列、MJ系列、Roche系列，博日系列及其他熒光定量PCR檢測(cè)儀。

五、儲(chǔ)存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6個(gè)月。

六、樣品采集、前處理與DNA提取
6.1 樣品采集
皮膚炭疽，取水泡液1mL；肺炭疽，采集咽拭子標(biāo)本，放入標(biāo)本采集管中；腸炭疽，取糞便1g。
6.2 樣本前處理：
固體樣本：手術(shù)剪剪碎混勻后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中，液體樣本：直接取上100μL于1.5mL滅菌離心管中。
6.3 DNA提取
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說(shuō)明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購(gòu)北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過(guò)柱法-熒光配套)，并按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。
對(duì)上述處理好的樣本加入50uL核酸提取液，100℃恒溫處理10min，13000rpm離心5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
 注：陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無(wú)需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽(yáng)性對(duì)照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽(yáng)性對(duì)照。

七、檢測(cè)步驟
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(qPCR MIX)、引物及探針，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 10μL N×10μL
Cap或robB或pagA引物及探針 5μL N×5μL
總量 15μL N×15μL
計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品/陰性對(duì)照(NTC)/陽(yáng)性對(duì)照(PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM，淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

八、結(jié)果分析
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果?；€(xiàn)和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線(xiàn)剛好超過(guò)正常陰性樣品擴(kuò)增曲線(xiàn)的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
(1) 陰性對(duì)照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線(xiàn)。
(2) 陽(yáng)性對(duì)照(PTC)：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線(xiàn)。
(3) 以上條件應(yīng)同時(shí)滿(mǎn)足，否則，此次試驗(yàn)視為無(wú)效。
8.3 結(jié)果判定
(1) 在試驗(yàn)成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽(yáng)性，表明核酸陽(yáng)性。
(2) Ct值顯示為無(wú)的樣本為陰性樣本，表明核酸陰性。
(3) 如果Ct值>35，判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線(xiàn)。如果擴(kuò)增曲線(xiàn)為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線(xiàn)，則為可疑陽(yáng)性，否則判為陰性。
(4) 對(duì)于可疑陽(yáng)性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行qPCR檢測(cè)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線(xiàn)為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線(xiàn)，判為樣本陽(yáng)性，表明核酸陽(yáng)性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項(xiàng)：
(1) 初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。并嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)步驟操作。
(2) 所有使用的離心管應(yīng)高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
(3) PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
(4) 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行，以免污染。
(5) 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。


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