副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素(TRH)單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒是高品質(zhì)的細(xì)菌PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科學(xué)研究，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價(jià)格，深為用戶稱道，了解更多副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素(TRH)單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒等細(xì)菌PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品請(qǐng)聯(lián)系我司咨詢訂購(gòu)。...

特別提示：包括副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素(TRH)單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素(TRH)單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：SYA072
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒

一、簡(jiǎn)介：
本試劑盒用一對(duì)副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對(duì)副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

二、用途：
該試劑盒適用于檢測(cè)水樣糞便、疑似污染的水、食物等樣本中的副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素(TRH)，用于副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素(TRH)感染的輔助診斷，其檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考。

三、試劑盒組成：(48T)

組份	數(shù)量	規(guī)格
TRH反應(yīng)液(TRH-qPCR MIX)	1管	672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX)	1管	48μL/管
陰性對(duì)照(NTC)	1管	50μL/管
TRH陽(yáng)性對(duì)照(TRH -PTC)	1管	50μL/管

四、熒光PCR 儀器適用范圍
ABI 系列、MJ 系列、Roche 系列，博日系列及其他熒光定量PCR 檢測(cè)儀。

五、儲(chǔ)存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6 個(gè)月。

六、樣品采集、前處理與DNA 提取
6.1 樣品采集
水樣便取0.5-1 mL；疑似污染的食物取1g。
6.2 樣本前處理：
水樣便13000rpm離心2min，去盡上清；疑似污染的食物用手術(shù)剪剪碎混勻后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；疑似污染的水直接取100μL。
6.3 DNA提取
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說(shuō)明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購(gòu)北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的(DNA提取試劑盒(過(guò)柱法-熒光配套)，并按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。
對(duì)上述處理好的樣本加入50uL核酸提取液，100℃恒溫處理10min，13000rpm離心5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
 注：陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無(wú)需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。
由于陽(yáng)性對(duì)照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽(yáng)性對(duì)照。

七、檢測(cè)步驟：
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR 反應(yīng)液(TRH-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm 離心10s。
設(shè)所需要的PCR 反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑	每個(gè)反應(yīng)加入的量	N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液	14μL	N×14μL
酶混合液	1μL	N×1μL
總量	15μL	N×15μL

計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N 個(gè)PCR 反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品/陰性對(duì)照(NTC)/陽(yáng)性對(duì)照(TRH-PTC)5μL，10000rpm 瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。推薦循環(huán)條件：

	1循環(huán)	50℃ for 2 min
預(yù)變性	1循環(huán)	95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增	40循環(huán)	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

八、結(jié)果分析：
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果?；€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過(guò)正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
(1)陰性對(duì)照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
(2)陽(yáng)性對(duì)照(TRH-PTC)：均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
(3)以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則，此次試驗(yàn)視為無(wú)效。
8.3 結(jié)果判定
(1)在試驗(yàn)成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽(yáng)性，表明副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素核酸陽(yáng)性。
(2)Ct值顯示為無(wú)的樣本為陰性樣本，表明副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素核酸陰性。
(3)如果Ct值>35，判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品，先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，則為可疑陽(yáng)性，否則判為陰性。
(4)對(duì)于可疑陽(yáng)性樣品，重新抽提核酸，再次進(jìn)行副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素qPCR檢測(cè)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線，判為樣本陽(yáng)性，表明副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素核酸陽(yáng)性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項(xiàng)：
(1)初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書。并嚴(yán)格按照說(shuō)明書步驟操作。
(2)所有使用的離心管應(yīng)高壓滅菌，而且必須不含DNA 酶。
(3)PCR 操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR 擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。
(4)樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行，以免污染。
(5)試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

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